骨格筋の発火に必須の新規遺伝子SH3P1の機能解析、及び疾患との関連

骨骼肌放电必需基因SH3P1的功能分析及其与疾病的关系

• 批准号: 19650101
• 负责人: 平田 普三
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650101/
• 关键词: 筋; 変異体

研究代表者はエチルニトロソウレアを変異原に用いて変異体スクリーニングを行い、ピンセットでつつく刺激を与えてもほとんど動かない変異体を単離した(以下、これを単に変異体と呼ぶ)また、この変異はメンデル遺伝することから単一の遺伝子の変異によるものと思われたが、実際に責任遺伝子のマッピングを行い、変異を6番染色体上の50kbの領域にしぼり、さらにその領域にある遺伝子をクローニング、シークエンスすることで、新規遺伝子SH3P1に変異を見いだした。SH3P1のイントロンのスプライシングアクセプター部位に点変異があり、選択的スプライシングに異常が生じて終止コドンが生じるため、正常なSH3P1タンパクが合成されないことを見出した。本研究はSH3P1の機能を解明することで、この変異体における運動異常のメカニズムを明らかにし、その知見のヒト疾患への応用を目指すものである。電気生理実験をさらにおし進め、運動時の筋電位変化をパッチクランプ法で測定する実験を行った。運動を誘発する触刺激のシグナルは感覚ニューロン→介在ニューロン(脳)→運動ニューロンを介して筋に伝えられ、正常個体の場合では30Hzの脱分極を筋で起こすことが知られているが、変異体でも30Hzの電位変化が同様に観察されたことから、変異体では筋に異常があることが示唆された。実際にSH3P1のmRNA発現を調べると、筋で強いシグナルが見られた。これは筋に異常があることと合致する結果である。また、SH3P1を特異的に認識するモノクローナル抗体の作製をし、局在の解析を試みたが、免疫染色で明確な細胞内局在は分からなかったが、筋細胞全体でシグナルが検出された。アンチセンスモルフォリノを用いたノックダウン実験で、変異体の表現系がコピーできたこと、正常型mRNAを導入するレスキュー実験で変異体の運動を回復できたことから、変異体の責任遺伝子はSH3P1であると必要十分に確認できた。

Research representatives は エ チ ル ニ ト ロ ソ ウ レ ア を - different original に with い て - variant ス ク リ ー ニ ン グ を い, ピ ン セ ッ ト で つ つ く stimulus を and え て も ほ と ん ど dynamic か な い - variant を 単 from し た (hereinafter, こ れ を 単 に - variant と shout ぶ) ま た, こ の - different は メ ン デ ル heritage 伝 す る こ と か ら 単 a の heritage 伝 son の - different に よ る も の と think わ れ た が, the event be に responsibility but 伝 の マ ッ ピ ン グ を line い, - different を 6 times on chromosome の 50 KB の field に し ぼ り, さ ら に そ の field に あ る heritage 伝 son を ク ロ ー ニ ン グ, シ ー ク エ ン ス す る こ と で, new rules but 伝 SH3P1 に - see different を い だ し た. SH3P1 の イ ン ト ロ ン の ス プ ラ イ シ ン グ ア ク セ プ タ ー parts に points - different が あ り, sentaku ス プ ラ イ シ ン グ に abnormal が raw じ て termination コ ド ン が raw じ る た め, normal な SH3P1 タ ン パ ク が synthetic さ れ な い こ と を shows し た. This study は SH3P1 の function を interpret す る こ と で, こ の - variant に お け る abnormal movements の メ カ ニ ズ ム を Ming ら か に し, そ の knowledge の ヒ ト disorders へ の 応 with を refers す も の で あ る. Electrical physiological be 気 験 を さ ら に お し め, sports の myogenic potential variations change を パ ッ チ ク ラ ン プ で method to determine the す る be 験 を line っ た. Movement を 発 lure す る touch stimulation の シ グ ナ ル は feeling 覚 ニ ュ ー ロ ン - > interface in ニ ュ ー ロ ン (脳) - exercise ニ ュ ー ロ ン を interface し て reinforcement に 伝 え ら れ, normal individual の で は 30 hz の points off very を reinforcement で up こ す こ と が know ら れ て い る が, - variant で も 30 hz の potential variations change が with others に 観 examine さ れ た こ と か ら, - variant で は Abnormal に of tendons がある とが とが indicates された. In reality, にSH3P1 mRNA shows を modulation べると, tendon で strong シグナ シグナ が が see られた. <s:1> れ に tendon に abnormality がある とと とと combination leads to する result である. ま た, SH3P1 を specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の cropping を し, bureau in の analytic を try み た が bureau, immune dyeing で な clear cell in は か ら な か っ た が, muscle cells all で シ グ ナ ル が 検 out さ れ た. ア ン チ セ ン ス モ ル フ ォ リ ノ を with い た ノ ッ ク ダ ウ ン be 験 で, 1 - の performance が コ ピ ー で き た こ と, normal mRNA を import す る レ ス キ ュ ー be 験 で - variant の movement を reply で き た こ と か ら, 1 - の responsibility but 伝 は SH3P1 で あ る と very necessary に confirm で き た.

项目成果

Identification and expression of voltage -gated calcium channel βsubunits in zebrafish.

斑马鱼电压门控钙通道β亚基的鉴定和表达。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Dev Dyn 237
• 作者: Weibin Zhou;et al.
• 通讯作者: et al.

ゼブラフィッシュの運動と行動

斑马鱼的运动和行为

• 发表时间: 2008
• 期刊: 細胞工学 27
• 作者: Weibin Zhou;et al.;平田普三
• 通讯作者: 平田普三

リアノジン受容体の異常による運動障害と疾患治療のモデル実験

兰尼碱受体异常导致的运动障碍和疾病治疗的模型实验

• 发表时间: 2007
• 作者: 渡邉貴樹;平田普三
• 通讯作者: 平田普三

硬骨魚類の逃避運動制御のメカニズム

硬骨鱼逃逸运动控制机制

• 发表时间: 2008
• 期刊: 実験医学 26
• 作者: 平田普三;他
• 通讯作者: 他

平田普三。運動を規定する遺伝子の解析

平田文三.

• 发表时间: 2007
• 作者: 平田普三;他;平田普三;平田普三
• 通讯作者: 平田普三