アポトーシス誘導活性増強システムを用いたミクログリア欠損マウスの作製と解析

使用细胞凋亡诱导活性增强系统生成和分析小胶质细胞缺陷小鼠

• 批准号: 19650108
• 负责人: 中山 学
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kazusa DNA Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650108/
• 关键词: 遺伝子; ゲノム; 動物; 脳・神経; 発生・分化; バイオテクノロジー; アポトーシス; 病態モデル動物

特定の細胞にアポトーシスを選択的に誘導させることにより、その細胞種のみ欠損させたマウスを作製するテクノロジーを開発することは、特定の細胞の個体レベルでの機能解析や病態モデルマウスの作製に有効なだけでなく、生体内でガン細胞を選択的に除去する治療薬の開発の応用技術として利用できる等の多くの可能性がある。アポトーシス関連蛋白質でありアダプター蛋白質であるFADD蛋白質の凝集能を高めることで、人為的にDISC複合体を形成させ、アポトーシスの誘導活性を増強させることができるように、DEDドメインとDDドメインを二つずつ融合した改変蛋白質と2個のDEDにバクテリオファージの自己集合活性を持つE蛋白質を融合させた改変蛋白質を作製し、各種培養細胞で強力なアポトーシスの誘導活性を示すことを明らかにしてきた。本年度は更に強力なアポトーシス誘導因子を作製するために、各ドメインを持つ蛋白質を作製しアポトーシス誘導活性を詳細に解析した。その結果、2個のDEDをタンデムに並べた部分が最もアポトーシス誘導能の増強に寄与することが明らかになった。また、ゲルろ過法や免疫沈降法により解析の結果、改変蛋白質が細胞中で巨大な複合体である人工的なDISC構造を形成することでアポトーシス誘導活性が増強することを示すことができた。人工的なDISC構造を経由したアポトーシスではカスパーゼ8が重要な役割を果たすが、このカスパーゼ8の発現が抑制されている神経芽腫細胞が存在する。このような神経芽腫細胞でも効率的に強力にアポトーシスを誘導させるために、2個のDEDとカスパーゼ8を融合させた新しい改変蛋白質を作製した。更にガン細胞特異的プロモーターの制御下でガン細胞特異的にアポトーシスを誘導することができた。この新規改変蛋白質を用いることで動物個体でも特定の細胞にアポトーシスを選択的に誘導することができると期待される。

Specific の cells に ア ポ ト ー シ ス を sentaku に induce さ せ る こ と に よ り, そ の cells of の み owe loss さ せ た マ ウ ス を cropping す る テ ク ノ ロ ジ ー を open 発 す る こ と は, specific の individual cells の レ ベ ル で の function analytical や pathological モ デ ル マ ウ ス の cropping に have sharper な だ け で な く, born in vivo で ガ ン cells を sentaku に remove す る cure The development of therapeutic drugs 応 the use of techniques と て て the utilization of で る る る and other <s:1> multiple く possibilities がある. ア ポ ト ー シ ス masato protein で あ り ア ダ プ タ ー protein で あ る の FADD protein aggregation can を high め る こ と で, man-made に DISC complex を form さ せ, ア ポ ト ー シ ス の induction activity を raised strong さ せ る こ と が で き る よ う に, DED ド メ イ ン と DD ド メ イ ン を two つ ず つ fusion し た - protein と 2 の DED に バ ク テ リ オ フ ァ ー ジ の his collection activity を hold つ E fusion protein を さ せ た し the change - protein を cropping, all kinds of culture cell で powerful な ア ポ ト ー シ ス の induction activity を shown す こ と を Ming ら か に し て き た. This year は に more powerful な ア ポ ト ー シ ス factor を cropping す る た め に, various ド メ イ ン を hold つ protein を cropping し ア ポ ト ー シ ス induction activity を detailed analytical し に た. そ の results, two の DED を タ ン デ ム に and べ た part が most も ア ポ ト ー シ ス can induce の raised strong に send す る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, ゲ ル ろ way や immune sink method に よ り parsing の results, change - protein が cells で huge な complex で あ る な of artificial DISC structure を form す る こ と で ア ポ ト ー シ ス induction activity が raised strong す る こ と を shown す こ と が で き た. Artificial な DISC structure を 経 by し た ア ポ ト ー シ ス で は カ ス パ ー ゼ 8 important な が "を cut fruit た す が, こ の カ ス パ ー ゼ 8 の 発 now が inhibit さ れ て い る god が 経 buds swell cells exist す る. こ の よ う な god 経 buds swell cells で も sharper rate に strong に ア ポ ト ー シ ス を induced さ せ る た め に, 2 の DED と カ ス パ ー ゼ 8 を fusion さ せ た new し い change - protein を cropping し た. More に ガ ン cell specific プ ロ モ ー タ ー の under the system of imperial で ガ ン cell specific に ア ポ ト ー シ ス を induced す る こ と が で き た. こ の new rules change - protein を い る こ と で individual animals で も specific の cells に ア ポ ト ー シ ス を sentaku に induce す る こ と が で き る と expect さ れ る.

项目成果

Engineered FADD induces apoptosis via an artificial death-inducing signaling complex (DISC)

工程化 FADD 通过人工死亡诱导信号复合物 (DISC) 诱导细胞凋亡

• 期刊: Int J Biomed Sci (In press)
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵;河野憲二;河野憲二;河野憲二;石井隆道;斉藤 美知子;河野 憲二;斉藤 美知子;Takashina T.;Takashina T.;E. Suzuki
• 通讯作者: E. Suzuki

Revival of apoptoric cells that display early-stage dynamic membrane blebbing.

显示早期动态膜起泡的凋亡细胞的复活。

• 发表时间: 2007
• 期刊: FEBS Letters 581
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵;河野憲二;河野憲二;河野憲二;石井隆道;斉藤 美知子;河野 憲二;斉藤 美知子;Takashina T.;Takashina T.
• 通讯作者: Takashina T.

Modifications enhance the apoptosis-inducing activity of FADD.

修饰增强了 FADD 的细胞凋亡诱导活性。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol Cancer Ther. 6
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵;河野憲二;河野憲二;河野憲二;石井隆道;斉藤 美知子;河野 憲二;斉藤 美知子;Takashina T.
• 通讯作者: Takashina T.

アポトーシス誘導活性を増強させたFADD改変蛋白質による人工DISC形成の解析

具有增强的细胞凋亡诱导活性的 FADD 修饰蛋白人工 DISC 形成的分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵;河野憲二;河野憲二;河野憲二;石井隆道;斉藤 美知子;河野 憲二;斉藤 美知子;Takashina T.;Takashina T.;E. Suzuki;高品智記
• 通讯作者: 高品智記

アポトーシス誘導活性を増強させた改変FADD蛋白質を用いた可逆的初期アポトーシス現象の解析

使用具有增强凋亡诱导活性的修饰 FADD 蛋白分析可逆早期凋亡现象

• 发表时间: 2007
• 作者: Takada;T.;T. Ishii;T. Machimoto;Y. Kimura;S. Tatsumi;Y. Miyake;河野 憲二;河野憲二;斉藤 美知子;新井布美子;松岡邦枝;古川賀絵;河野憲二;河野憲二;河野憲二;石井隆道;斉藤 美知子;河野 憲二;斉藤 美知子;Takashina T.;Takashina T.;E. Suzuki;高品智記;高品 智記
• 通讯作者: 高品 智記