遺伝子疾患動物評価系を用いたビタミンD誘導体の開発および 遺伝子治療法の確立

利用遗传病动物评价体系开发维生素D衍生物并建立基因治疗

• 批准号: 22H02263
• 负责人: 榊 利之
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: Toyama Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02263/
• 关键词: ビタミンD; ビタミンD誘導体; ゲノム編集; 医薬品; 作用メカニズム; ビタミンD受容体; 脱毛症; アデノウイルスベクター; Cas9; Cas9ニッカーゼ

①　ビタミンＤおよびビタミンＤ受容体の作用メカニズムの全貌の解明---VDR-H301Q およびVDR-R270L/H301Qの2系統についてはホモ接合体を取得することができた。両者ともに血中カルシウム濃度の低下、骨形成異常が見られたたが、両者ともに脱毛症状は見られなかった。1,25D3や25D3などのリガンドを結合することができないVDR-R270L/H301Qをもつラットに脱毛症状が見られなかったことから、毛周期の維持はリガンド非結合型VDRの作用であることが明確になった。また、CYP27B1発現アデノウイルス感染細胞をポジティブコントロールとして用いて市販の抗CYP27B1抗体を2種評価したところ、これらの抗体はCYP27B1とは異なるタンパク質に結合することを明らかにし、これらの抗体を用いたウェスタンブロットや組織染色データが誤りであることを明らかにした。②　VDR-KOに基づくⅡ型くる病に対する遺伝子治療の有効性の検証---VDR cDNAを挿入したVDR発現アデノウイルスベクターをVDR-KOラットに皮内投与したところ、顕著な発毛促進が見られた(論文投稿中)。投与後、約2か月効果が持続した。通常、アデノウイルスベクターを用いた場合、目的タンパク質の発現は一過的であり、2週間程度で消失する場合が多いが、予想外の結果である。これらの結果はアデノウイルスベクターの皮内投与でケラチノサイト幹細胞にVDRが発現したことを示唆している。恒久的な治療を目的としたゲノム編集治療を目指す。また、本研究で用いるガイドRNA/Cas9/ドナーＤＮＡの一体発現型アデノベクターの作製に成功した。VDR-KOラットから調製した皮膚細胞に感染させたところ、1,25D3投与によるCYP24A1mRNA量の顕著な上昇が見られ、数％の細胞でノックインが起こったことが示唆された。

① Explanation of the full picture of the role of the D-receptor in the D-receptor ---VDR-H301QおよびVDR-R270L/H301Qの2 system についてはホモjoint body is obtained by することができた. The patient suffered from a low concentration of karuzumab in the blood and abnormal bone formation, and the symptoms of hair loss caused by Tokaru. 1,25D3や25D3などのリガンドをcombinationすることができないVDR-R270L/H301QをもつラットThe symptoms of hair loss are as follows: the maintenance of hair cycle and the effect of non-binding VDR are clear.また、CYP27B1 appears in アデノウイルス infected cells をポジティブコントロールとThere are 2 types of commercially available anti-CYP27B1 antibodies used here. Comments on the use of commercially available anti-CYP27B1 antibodies. YP27B1 とはiso-なるタンパク性に-binding することを明らかにし、これらの antibodyをUsing いたウェスタンブロットや tissue staining データがerror りであることを明らかにした. ② VDR-KO disease type Ⅱ type くる disease に対する缝子 treatment and effectiveness of the disease---VDR cDNA insertion system VDR-KORA Intradermal injection of ットにしたところ, and な発毛 promoted が见られた (thesis is under submission). After administration, the effect lasts for about 2 months. Normally, the purpose of using the アデノウイルスベクターを is the purpose The situation that has passed has not disappeared to a certain extent within 2 weeks, and the situation has been too much, and the result has been unexpected. Intradermal injection and でケラチノサイトStem cellsにVDRが発appearsしたことをshows instigationしている. The long-lasting treatment is compiled by the treatment of the purpose of treatment. In this study, we succeeded in using the いるガイドRNA/Cas9/ドナーＤＮＡのOne-piece clinical type アデノベクターの. VDR-KO ラットから modulated skin cell infection させたところ、1,25D3 administration によるCYP2 The amount of 4A1mRNA has increased, and the percentage of cells has increased.

项目成果

3型くる病を引き起こす変異型CYP3A4の機能解析

引起3型佝偻病的突变体CYP3A4的功能分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 安田佳織;仲谷尚人;真野寛生;生城真一;今石浩正;榊利之
• 通讯作者: 榊利之

側鎖にフッ素を有するビタミンD誘導体の代謝およびヒト乳がん細胞株に対する増殖抑制効果

侧链含氟维生素D衍生物的代谢及其对人乳腺癌细胞系的生长抑制作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩井悠一郎;大下遥己;真野寛生;川越文裕;高野真史;橘高敦史;榊利之;安田佳織
• 通讯作者: 安田佳織

アデノウイルスベクターを用いたⅡ型くる病モデルラットへの遺伝子治療およびゲノム編集治療

利用腺病毒载体对II型佝偻病模型大鼠进行基因治疗和基因组编辑治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: 木瀬智子;岡田只士;安田佳織;西川美宇;生城真一;金本義明;加藤茂明;中西友子;斉藤泉;榊利之
• 通讯作者: 榊利之

超微細針を有する自己溶解型マイクロニードルの作製および評価

超细针自溶微针的制备及评价

• 发表时间: 2022
• 作者: 宮﨑睦久;三浦早那香;山岸里緒;竹井敏;川野優希;横山義之;杉野直人;亀田隆夫;安田佳織
• 通讯作者: 安田佳織

Development of nanoluciferase-based sensing system that can specifically detect 1α,25-dihydroxyvitamin D in living cells

开发基于纳米荧光素酶的传感系统，可特异性检测活细胞中的 1α,25-二羟基维生素 D

• DOI: 10.1016/j.jsbmb.2022.106233
• 发表时间: 2023
• 期刊: The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology
• 作者: Mano Hiroki;Kushioka Takuya;Kise Satoko;Nagao Chika;Iijima Ayano;Nishikawa Miyu;Ikushiro Shinichi;Yasuda Kaori;Matsuoka Sayuri;Sakaki Toshiyuki
• 通讯作者: Sakaki Toshiyuki