遺伝子疾患動物評価系を用いたビタミンD誘導体の開発および 遺伝子治療法の確立

利用遗传病动物评价体系开发维生素D衍生物并建立基因治疗

• 批准号: 22H02263
• 负责人: 榊 利之
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: Toyama Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02263/
• 关键词: ビタミンD; ビタミンD誘導体; ゲノム編集; 医薬品; 作用メカニズム; ビタミンD受容体; 脱毛症; アデノウイルスベクター; Cas9; Cas9ニッカーゼ

①　ビタミンＤおよびビタミンＤ受容体の作用メカニズムの全貌の解明---VDR-H301Q およびVDR-R270L/H301Qの2系統についてはホモ接合体を取得することができた。両者ともに血中カルシウム濃度の低下、骨形成異常が見られたたが、両者ともに脱毛症状は見られなかった。1,25D3や25D3などのリガンドを結合することができないVDR-R270L/H301Qをもつラットに脱毛症状が見られなかったことから、毛周期の維持はリガンド非結合型VDRの作用であることが明確になった。また、CYP27B1発現アデノウイルス感染細胞をポジティブコントロールとして用いて市販の抗CYP27B1抗体を2種評価したところ、これらの抗体はCYP27B1とは異なるタンパク質に結合することを明らかにし、これらの抗体を用いたウェスタンブロットや組織染色データが誤りであることを明らかにした。②　VDR-KOに基づくⅡ型くる病に対する遺伝子治療の有効性の検証---VDR cDNAを挿入したVDR発現アデノウイルスベクターをVDR-KOラットに皮内投与したところ、顕著な発毛促進が見られた(論文投稿中)。投与後、約2か月効果が持続した。通常、アデノウイルスベクターを用いた場合、目的タンパク質の発現は一過的であり、2週間程度で消失する場合が多いが、予想外の結果である。これらの結果はアデノウイルスベクターの皮内投与でケラチノサイト幹細胞にVDRが発現したことを示唆している。恒久的な治療を目的としたゲノム編集治療を目指す。また、本研究で用いるガイドRNA/Cas9/ドナーＤＮＡの一体発現型アデノベクターの作製に成功した。VDR-KOラットから調製した皮膚細胞に感染させたところ、1,25D3投与によるCYP24A1mRNA量の顕著な上昇が見られ、数％の細胞でノックインが起こったことが示唆された。

A complete explanation of the function of VDR-H301Q and VDR-R270L/H301Q receptors is given. The patient's blood concentration is low, bone formation is abnormal, and the patient's hair loss is abnormal. 1,25 D3, VDR-R270L/H301Q CYP27B1 is found in infected cells and antibodies against CYP27B1 are evaluated in two ways. (2) VDR-KO gene therapy for type II disease: effective evidence of VDR gene therapy--VDR cDNA gene therapy for VDR gene therapy for type II disease: VDR gene therapy for VDR gene therapy for VDR After the vote, about 2 months later, the fruit was kept. Usually, when it is used, the quality of the target appears once, disappears within 2 weeks, and the result is unexpected. The results of this study are as follows: 1. The development of VDR in stem cells is the result of intradermal administration. The purpose of permanent treatment is to compile treatment instructions. In this study, we successfully developed an integrated RNA/Cas9/DNA expression system. VDR-KO gene expression in skin cells increased significantly after infection with CYP24A1 mRNA on 1, 25D3, and increased in several percent of cells.

项目成果

3型くる病を引き起こす変異型CYP3A4の機能解析

引起3型佝偻病的突变体CYP3A4的功能分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 安田佳織;仲谷尚人;真野寛生;生城真一;今石浩正;榊利之
• 通讯作者: 榊利之

側鎖にフッ素を有するビタミンD誘導体の代謝およびヒト乳がん細胞株に対する増殖抑制効果

侧链含氟维生素D衍生物的代谢及其对人乳腺癌细胞系的生长抑制作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩井悠一郎;大下遥己;真野寛生;川越文裕;高野真史;橘高敦史;榊利之;安田佳織
• 通讯作者: 安田佳織

アデノウイルスベクターを用いたⅡ型くる病モデルラットへの遺伝子治療およびゲノム編集治療

利用腺病毒载体对II型佝偻病模型大鼠进行基因治疗和基因组编辑治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: 木瀬智子;岡田只士;安田佳織;西川美宇;生城真一;金本義明;加藤茂明;中西友子;斉藤泉;榊利之
• 通讯作者: 榊利之

超微細針を有する自己溶解型マイクロニードルの作製および評価

超细针自溶微针的制备及评价

• 发表时间: 2022
• 作者: 宮﨑睦久;三浦早那香;山岸里緒;竹井敏;川野優希;横山義之;杉野直人;亀田隆夫;安田佳織
• 通讯作者: 安田佳織

Development of nanoluciferase-based sensing system that can specifically detect 1α,25-dihydroxyvitamin D in living cells

开发基于纳米荧光素酶的传感系统，可特异性检测活细胞中的 1α,25-二羟基维生素 D

• DOI: 10.1016/j.jsbmb.2022.106233
• 发表时间: 2023
• 期刊: The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology
• 作者: Mano Hiroki;Kushioka Takuya;Kise Satoko;Nagao Chika;Iijima Ayano;Nishikawa Miyu;Ikushiro Shinichi;Yasuda Kaori;Matsuoka Sayuri;Sakaki Toshiyuki
• 通讯作者: Sakaki Toshiyuki