特定細胞をターゲットとする遺伝子治療に向けての革新的技術の開発

开发针对特定细胞的基因治疗创新技术

• 批准号: 04807163
• 负责人: 矢守 隆夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04807163/
• 关键词: 細胞特異的遺伝子導入; 遺伝子治療; lambdafoo; ラムダファージ; 遺伝子ベクター; レクチン; プロテインA; 分子生物学; λfoo; 細胞特異性; IGF-I; BPA

この研究は、バクテリオファージlambdafooベクターを用い、ねらった細胞に特定の遺伝子を導入する技術を確立し、細胞特異的遺伝子治療等へ応用することをめざしている。lambdafooベクターは2つの外来遺伝子のクローニング部位を持つ。第1の外来遺伝子(リガンド遺伝子)は、ウイルス粒子表面に発現し、第2の外来遺伝子(モジュレーター遺伝子)は、動物細胞内で発現するよう工夫されている。本年度は,リガンド遺伝子としてプロテインA(proA)cDNA、モジュレーター遺伝子としてルシフェラーゼ(luc)cDNAのlambdafooベクターへの組み込みと発現を検討した。proAは抗体のFc部分と特異的に結合するため、理論的にはproAを発現したlambdafooを特定の抗体と混ぜるだけでその抗体を表面にもつlambdafooを作成でき、抗体の種類を変えることで様々な抗原に結合するlambdafooを得ることが可能となる。まずlambdafooベクターのテール蛋白質遺伝子の下流へproAcDNAを導入、さらにモジュレーター遺伝子部位へSV40プロモーター下流にluc遺伝子を配したプラスミドDNAを組み込んだ(これをlambdaproA-lucと呼ぶ)。サザンブロッティングによりproAおよびlucのcDNAが組み込まれたことを確認した。ついで抗proA抗体を用いたウェスタンブロッティングによりlambdaproA-luc粒子にproAとテール蛋白質との融合蛋白質が発現したことを確認した。ただし、現段階ではこの蛋白質と抗体Fc部分との特異的結合は証明できていない。これはproA発現時にFc結合部位のフォールディングがなんらかの原因で正しく起こらなかったためと考えられ、現在発現条件の検討を進めている。これ迄リガンド遺伝子としてBauhinia purpurea agglutinin(レクチンの一種)のcDNAとproAのcDNAを検討した結果、いずれもlambdafooベクターへの遺伝子導入迄は技術的に問題ないことが証明できた。今後、lambdafooベクターを改良しリガンド遺伝子の発現効率をさらに高めること、およびリガンド蛋白質の生物活性を保つ条件を確立することで細胞特異的遺伝子導入システムの完成が可能と考えられる。

このResearchは、バクテリオファージlambdafooベクターを Useい、ねらったCellにSpecific We have established the technology for the introduction and use of cell-specific endothelial cells and other treatments. lambdafooベクターは2つの外行伝子のクローニングpartsをholdつ. The 1st alien remnant (リガンド人伝子), the appearance of the ウイルス particle surface, the 2nd alien The remaining parts of the body (モジュレーター弝子) are the ones that appear in animal cells. This year, リガンド弝子としてプロテインA (proA) cDNA, モジュレーター缝子としてルシフェラーゼ(luc)cDNAのlambdafooベクターへの集团み込みと発appearsを検椟した. ProA antibody's Fc part and specific binding antibody, theoretical proA antibody and specific antibody and mixed antibodyをsurfaceにもつlambdafooをmadeでき、antibodyのkindを変えることで様々なantigenにbindingするlambdafooをgetることがpossibleとなる.まずlambdafooベクターのテールprotein 缝子のdegradable へproAcDNAを Introduction, さらにモジュレーター缝子 PARTへS V40プロモーターIndecent にluc伝子をmatching したプラスミドDNAをgroup み込んだ(これをlambdaproA-lucとHUぶ).サザンブロッティングによりproAおよびlucのcDNAが组み込まれたことをconfirmedした.ついでanti-proA antibody is used いたウェスタンブロッティングによりlambdapro A-luc particleにproAとテールproteinとのfusion proteinが発appearsしたことをconfirmationした. At this stage, it has been proven that the specific binding of the protein and the Fc part of the antibody to the antibody has been demonstrated.これはproA発existing にFc binding site のフォールディングがなんらかの reasonで正しく出こらなかったためと考えられ、Now the conditions are now の検说を进めている. Bauhinia purpurea agglutinin(レクチンのkind)のcDNAとproAのcDNAを検questionした results,いずれもlambdafooベクターへの伝子 introduced the problem of the technology so far ないことがprovenできた. From now on, the efficiency of lambdafoo will be improved and improved, and the efficiency will be improved. It is possible to establish the biological activity of the protein and to ensure that it is possible to complete the introduction of cell-specific genes into the protein.