高転移性細胞に対するIGFーIの作用の解析

IGF-I对高转移细胞的影响分析

• 批准号: 03152133
• 负责人: 矢守 隆夫
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152133/
• 关键词: 癌転移; IGFーI; チロシンキナ-ゼ; チロシンリン酸化; ホスファチジルイノシト-ル3キナ-ゼ; 増殖因子; シグナル伝達

高転移性NLー17細胞に対するIGFーIの増殖促進効果は、その血中レベルの1/10以下の濃度(10ng/ml)で認めれる。一方、低転移性NLー44細胞に対するIGFーIの効果は弱い。両者の間で、IGFーIレセプタ-発現の差は見られなかったが、NLー17細胞ではIGFーI刺激により、150〜160kDa(pp150/160)の細胞質蛋白に著明なチロシンリン酸化が認められ、このリン酸化の程度は、NLー44細胞に比べ有意に高いことが判明した。この反応はEGF、PDGFでは惹起されずIGFーIに特異的であった。pp150/160のチロシンリン酸化はIGFーI添加後10秒以内に認められ、IGFーIを除去すると30分以内で基底状態に復帰した。以上のことから、pp150/160はIGFーIのシグナル伝達に重要な役割をなすと考えられた。そこで、増殖因子レセプタ-キナ-ゼの基質として注目されているホスホリパ-ゼCγ(PLCγ)およびホスファチジルイノシト-ル3キナ-ゼ(PI3K)との関連を調べた。PLCγ(145kDa)はその分子量がpp150/160と近いが、IGFーIではPLCγのチロシンリン酸化はおこらず両者は異なる分子であった。一方、IGFーI刺激したNLー17細胞抽出液を抗PI3Kモノクロ-ナル抗体CA3(東京大学農学部福井泰久博士より供与された)で免疫沈降し、沈降物を抗リン酸チロシン抗体によりイムノブロットした結果、PI3Kにチロシンリン酸化されたpp150/160が結合していることが明らかとなった。従って、pp150/160はIGFーI刺激によりチロシンリン酸化されPI3Kに結合することによってIGFーIのシグナル伝達に関与することが示唆された。pp150/160のチロシンリン酸化体の精製を行なうため、モノクロ-ナル抗リン酸チロシン抗体MAb25.2G2産生ハイブリド-マを樹立した。この抗体で作製したアフィニティカラムに、IGFーI刺激したNLー17細胞抽出液をかけることによりpp150/160の濃縮と部分精製に成功した。この画分には、pp150/160以外の微量蛋白のチロシンリン酸化体が含まれており、さらに精製を進めている。

IGF-1 was found to promote the proliferation of highly migratory NL-17 cells at concentrations less than 1/10 of that in blood (10ng/ml). A square, low mobility NL-44 cell line with IGF-I effect is weak. In NL-17 cells, IGF-1 was stimulated by IGF-1, and 150 - 160kDa(pp150/160) cytoplasmic protein was detected. The anti-EGF and PDGF reactions are caused by IGF I specific factors. pp150/160: The substrate is recovered within 10 seconds after IGF I is added and within 30 minutes after IGF I is removed. The above pp150/160 is an important part of IGF I. In addition to the above, the author also pointed out that the genetic factors of the three kinds of genes are different from each other, such as Cγ(PLCγ) and Cγ(PI3K). PLCγ(145kDa) has a molecular weight of pp150/160. IGF-I has a molecular weight of pp150/160. One side, IGF-1 stimulated NL-17 cell extract anti-PI-3K anti-inflammatory antibody CA3 (provided by Dr. Yasuhisa Fukui, Faculty of Agriculture, University of Tokyo), immune sedimentation, sediment anti-inflammatory antibody, PI-3K anti-inflammatory antibody pp150/160 binding results. Pp150/160: IGF I Stimulation and Activation of PI 3K pp150/160 anti-acid antibody MAb25.2G2 produced anti-acid antibody MAb25.2G2 The antibody was successfully purified by concentration and partial purification of NL17 cell extract stimulated by IGF-1. The protein content of this protein is different from pp150/160, and the protein content is different from pp150/160.

项目成果

矢守 隆夫,鶴尾 隆: "癌転移と増殖因子" 蛋白質 核酸 酵素. 36. 1400-1405 (1991)

Takao Yamori、Takashi Tsuruo：“癌症转移和生长因子”蛋白质核酸酶 36. 1400-1405 (1991)

Yamori,T.et al.: "Insulin-like growth factor I rapidly induces tyrosine phosphorylation of a Mr 150,000 and a Mr 160,000 protein in highly metastatic mouse colon carcinoma 26 NL-17 cells." Cancer Res.51. 5859-5865 (1991)

Yamori,T.等人：“在高度转移的小鼠结肠癌 26 NL-17 细胞中，胰岛素样生长因子 I 快速诱导 Mr 150,000 和 Mr 160,000 蛋白的酪氨酸磷酸化。”