alpha1アドレナリン受容体遺伝子導入培養心筋細胞における各種イオンチャンネル活動の解析

导入α1肾上腺素受体基因的培养心肌细胞中各种离子通道活性的分析

• 批准号: 05670114
• 负责人: 辻本 豪三
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670114/
• 关键词: alpha1-アドレナリン受容体; 遺伝子導入; 受容体サブタイプ

アドレナリン受容体(AR)は神経系をはじめ、循環器、内分泌系においても、重要な役割をしていることが知られている。この受容体には機能や薬剤の感受性、組織分布などにより種々サブクラス(alpha1、alpha2、beta1、beta2およびbeta3)に分けられている。これらのうち、alpha1ARはカテコールアミン(アドレナリンとノルアドレナリン)によってPI代謝亢進、細胞内Ca2+の上昇により種々の生理反応に関わっていることが知られている。本年度、我々はヒト前立腺cDNAライブラリーより、ヒトalpha1アドレナリン受容体(AR)をコードしている遺伝子の1つをクローニングした。クローニングした。この遺伝子は、全長2.28kbで、そのうちORF(open reading frame;翻訳可能な配列)は1.4kbであり、塩基配列より推定されるアミノ酸残基数は466個であった。このヒトalpha1CAR遺伝子とウシalpha1CAR遺伝子とのORFでの相同性は、塩基配列で90%、推定アミノ酸配列においては93%の非常に高い相同性を示した。また、この遺伝子はG-蛋白共役受容体ファミリーに共通の7回の膜貫通領域を持つ構造をしており、推定アミノ酸配列におけるウシalpha1CARとの膜貫通領域の相同性は97%、比較的相同性が低い7回目の膜貫通領域以降の細胞内C末端領域(テール部位)についても83%の相同性が認められた。更に、そのcDNA塩基配列を元に、逆転写酵素-PCR法にてヒト各組織におけるalpha1CARのmRNA発現を検討し、心臓、肝臓、大脳等に局在することを確認した。心筋におけるこのalpha1CARの各種イオンチャンネルへの影響を解析する目的でG蛋白質と共役する第三細胞内ループに対するペプチド抗体を作成し、パッチクランプ法を用いて検討中である。

The receptor (AR) is a part of the nervous system, the circulatory system, the endocrine system, and the important system. These receptors are functional, sensitive, and distributed in tissues. These receptors are classified as alpha1, alpha2, beta 1, beta 2, and beta 3. The alpha1AR is related to PI hypermetabolism, intracellular Ca2 + elevation, and physiological reaction. This year, we are looking forward to the development of a cDNA library, a library of alpha1 receptors (AR), and a library of cDNA library.クローニングした。The total length of this gene is 2.28kb, and the ORF(open reading frame; possible alignment) is 1.4kb, and the number of acid residues is 466. The identity of the alpha1CAR gene to the ORF is 90%, and the putative nucleotide sequence is 93%. The identity of the membrane penetration domain of the G-protein receptor was 97%, and the identity of the membrane penetration domain of the alpha1CAR was 83%. In addition, the gene expression of alpha-1CAR in various tissues was investigated by reverse transcriptase polymerase chain reaction (PCR), and the gene expression of alpha-1CAR in heart, liver and kidney was confirmed. To analyze the effects of different kinds of protein on the growth of alpha1CAR in the heart muscle, the G protein and the third intracellular protein antibody were prepared and discussed in the middle of the study.

项目成果

Hirasawa,A.,Tsujimoto,G.,et al.: "Cloning,functional expression and tissue distribution of human cDNA for the alpha1c-adrenergic receptor." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 902-909 (1993)

Hirasawa,A.,Tsujimoto,G.,et al.：“α1c-肾上腺素受体的人类 cDNA 的克隆、功能表达和组织分布。”

Tanabe,N.,Tsujimoto,G.,et al.: "Angiontensin II receptors in the rat urinary bladder smooth muscle:type 1 subtype receptors mediate contractile responses." Journal of Urology. 150. 1056-1059 (1993)

Tanabe, N., Tsujimoto, G., et al.：“大鼠膀胱平滑肌中的血管紧张素 II 受体：1 型亚型受体介导收缩反应。”

Hirasawa,A.,Tsujimoto,G.,et al.: "Distribution and developemental chage of vasopressin V_<1A> and V_2receptor mRNA in rats." Eur.J.Pharmacol.(Mol Pharmacol section). (in press).

Hirasawa,A.,Tsujimoto,G.,et al.：“大鼠加压素 V_<1A> 和 V_2 受体 mRNA 的分布和发育变化。”

Horie,K.,Tsujimoto,G.,et al.: "Identification of alpha1c-adrenergic receptor mRNA in bovine retinal pigment epithelium" Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.34. 2769-2775 (1993)

Horie,K.、Tsujimoto,G. 等人：“牛视网膜色素上皮细胞中 α1c-肾上腺素能受体 mRNA 的鉴定”Invest.Ophasemol.Vis.Sci.34。