ATP細胞間情報伝達作用の個体レベルでの解析

个体水平 ATP 细胞间通讯分析

• 批准号: 15659063
• 负责人: 辻本 豪三
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659063/
• 关键词: プリン受容体チャネル; 受容体相互作用; 下垂体機能; アデノシン三リン酸; 蛍光蛋白質; イオンチャネル; スプライシングバリアント; 共鳴エネルギー移動; P2X2受容体; ATP受容体; 下垂体細胞

この研究ではマウス下垂体より新たなP2X2受容体スプライシングバリアントをトランスクリプトームの解析より同定した。P2X2には野生型のP2X2aとカルボキシ末端スプライシングバリアントのP2X2bに加え、新たなバリアントP2X2eを発見した。このP2X2eは、ATPの刺激に対し、P2X2bなどこれまで知られているどのP2X2スプライシングバリアントよりもはるかに早い脱感作を起こすことが分かった。これはATP受容体の活性を担う、重要な受容体部分を同定する際に、手がかりとなる有用な知見である。P2X2eはバリアントの中ではカルボキシル末端が最も短く、スプライシングにより、受容体の活性化時間が短くなり、細胞内カルシウム濃度の過度な上昇が押さえられる。下垂体細胞内ではP2X2aとP2X2bがほぼ等量共存し、P2X2eの発現量はこれらの約10%であった。P2X2aによる細胞内カルシウム濃度の上昇が、P2X2b及びP2X2eと共存することで適度に保たれている可能性が示唆された。これより、細胞内カルシウム動態を通じ、成長ホルモンや、ゴナドトロピン分泌ホルモンの分泌が調節を受けている事が示唆された。さらに、3種類のスプライシングバリアント受容体は全ての組み合わせでチャネルを作成しうることを、光エネルギーの共振による移動を利用して同定した。すなわち、ルシフェラーゼまたはGreen florescence proteinを結合させたチャネルサブユニットは正常に機能し、スプラィシングが起こるとチャネルの細胞内部分は強く相互作用することが示された。さらに、マウスのP2X2ゲノム上の遺伝子構造を明らかにした後、スプライシング様式に特異的なトランスジェニック動物の作出を試みたが成功せず、個体での解析は不可能であった。今後遺伝子変異動物作成が困難である原因について解明を進め、寺期特異的発現を含めた他の方法を探る必要があると考えられた。今回の研究において、P2X受容体においてサブユニット間の物理的相互作用を知る方法を確立した。

こ の research で は マ ウ ス pituitary よ り new た な P2X2 by let body ス プ ラ イ シ ン グ バ リ ア ン ト を ト ラ ン ス ク リ プ ト ー ム の parsing よ り be し た. P2X2 に は wild-type の P2X2a と カ ル ボ キ シ end ス プ ラ イ シ ン グ バ リ ア ン ト の P2X2b に え, new た な バ リ ア ン ト P2X2e を 発 see し た. こ の P2X2e は, ATP の stimulation に し, seaborne P2X2b な ど こ れ ま で know ら れ て い る ど の P2X2 ス プ ラ イ シ ン グ バ リ ア ン ト よ り も は る か に い early to take off the feeling as を up こ す こ と が points か っ た. こ れ は ATP activity by the capacity of body の を bear う, important な let body part を with fixed す る interstate に, hand が か り と な る な useful knowledge で あ る. In P2X2e は バ リ ア ン ト の で は カ ル ボ キ シ ル end が も short く, most ス プ ラ イ シ ン グ に よ り の activeness, let body short time が く な り, intracellular カ ル シ ウ ム excessive concentration の な rise が detain さ え ら れ る. Sagging cells within で は P2X2a と P2X2b が ほ ぼ same し, P2X2e の 発 now quantity は こ れ ら の about 10% で あ っ た. P2X2a に よ る intracellular カ ル シ ウ ム concentration rising の が, P2X2b and び P2X2e と coexistence す る こ と で moderate に bartender た れ て い が る possibility in stopping さ れ た. こ れ よ り, intracellular カ ル シ ウ ム dynamic を じ and growth ホ ル モ ン や, ゴ ナ ド ト ロ ピ ン secretion ホ ル モ ン の secretion regulation が を by け て い が る things in business さ れ た. さ ら に, 3 species の ス プ ラ イ シ ン グ バ リ ア ン ト suffer let body は whole て の group み close わ せ で チ ャ ネ ル を made し う る こ と を, light エ ネ ル ギ ー の resonance に よ る mobile を using し て with fixed し た. す な わ ち, ル シ フ ェ ラ ー ゼ ま た は Green florescence protein を combining さ せ た チ ャ ネ ル サ ブ ユ ニ ッ ト は に function し, normal ス プ ラ ィ シ ン グ が up こ る と チ ャ ネ ル の part strong は く interaction in the cell す る こ と が shown さ れ た. さ ら に, マ ウ ス の P2X2 ゲ ノ ム の on heritage 伝 sub structure を Ming ら か に し た, ス プ ラ イ シ ン グ others type に specific な ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ の ク animals try to make を み た が successful せ ず, individual で の parsing は impossible で あ っ た. Future heritage 伝 sub - different animals make が difficult で あ る reason に つ い て interpret を into め, temple stage specific 発 now を め た he の way を agent る necessary が あ る と exam え ら れ た. This time, we will study the <s:1> physical interaction between にお て て and P2X acceptor にお てサブユニット てサブユニット を to know the る method を to establish た た.

项目成果

Identification of ectodomain regions contributing to gating, deactivation, and resensitization of purinergic P2X receptors.

鉴定有助于嘌呤能 P2X 受体的门控、失活和再敏化的胞外域区域。

• DOI: 10.1523/jneurosci.1471-04.2004
• 发表时间: 2004
• 期刊: The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience
• 作者: Zemkova,Hana;He,Mu-Lan;Koshimizu,Taka-aki;Stojilkovic,StankoS
• 通讯作者: Stojilkovic,StankoS

Carvedilol selectively inhibits oscillatory intracellular calcium changes evoked by human alpha1D- and alpha1B-adrenergic receptors.

卡维地洛选择性抑制由人 α1D 和 α1B 肾上腺素能受体引起的振荡细胞内钙变化。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Cardiovasc Res. 63(4)
• 作者: Koshimizu TA;Tsujimoto G;Hirasawa A;Kitagawa Y;Tanoue A.
• 通讯作者: Tanoue A.

Koshimizu TA: "Recent advances in alpha1-adrenoceptor pharmacology."Pharmacol.Ther.. 98. 235-244 (2003)

小清水 TA：“α1-肾上腺素受体药理学的最新进展。”Pharmacol.Ther.. 98. 235-244 (2003)

Intracellular calcium measurements as a method in studies on activity of purinergic P2X receptor channels

• DOI: 10.1152/ajpcell.00042.2003
• 发表时间: 2003-08-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-CELL PHYSIOLOGY
• 影响因子: 5.5
• 作者: He, ML;Zemkova, H;Stojilkovic, SS
• 通讯作者: Stojilkovic, SS

Tanone A: "The Vasopressin V1b receptor critically regulates hypothalamic-pituitary-adrenal axis activity under both stress and resting conditions."J.Clin.Invest.. 113. 302-309 (2004)

Tanone A：“加压素 V1b 受体在压力和休息条件下严格调节下丘脑 - 垂体 - 肾上腺轴活动。”J.Clin.Invest.. 113. 302-309 (2004)