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骨髄性白血病細胞株単球系分化の鍵酵素シアル酸転移酵素のcDNAクローニング

唾液酸转移酶的 cDNA 克隆，唾液酸转移酶是骨髓性白血病细胞系单核细胞分化的关键酶

基本信息

批准号：
05670150
负责人：
中村充
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は特定のガングリオシドが,骨髄球系の白血病細胞株並びに新鮮白血病細胞を終末分化細胞に分化誘導し、その増殖を抑制することを見いだしてきた。その結果、顆粒球系分化誘導能を持つネオラクト系ガングリオシドの生合成にはLc3Cer合成酵素(beta1→3N-アセチルグルコサミン転移酵素)が、そして単球系分化誘導能を持つGM3の生合成にはGM3合成酵素(alpha2→3シアル酸転移酵素)がキーエンザイムとなっていることが明かとなった(Nakamura.M.et al,J.Biol,Chem.1992)。この2つのキーエンザイムの遺伝子活性化及び制御機構を解明することが重要であることが判明したが、本研究では、これら2つの糖転移酵素蛋白をコードするcDNAのクローニングをめざした。まず、Lc3Cer合成酵素については、GlcNAcbeta1→3Galを特異的に認識する単クローン性抗体HF12を調製した。その性質を解析し、とくに細胞接着現象との関わりでGlcNAcbeta1→3Ga1の末端糖鎖を持つLc3Cerが特徴的に発現していることを見いだした。現在本抗体を用いてLc3Cer合成酵素の発現クローニングに着手しているところである。次いでGM3合成酵素については、今までにクローニングされているシアル酸転移酵素遺伝子の150bp程度の局所的ホモロジーから、PCR法およびプラークハイブリダイゼーション法を用いて、1つの全長cDNAと思れるクローンをとった。現在その過剰発現系を構築して、GM3合成酵素との異同並びに触媒する酵素反応の詳細につき解析中である。

We found that the differentiation and proliferation of leukemia cell lines and fresh leukemia cells were inhibited by specific factors. As a result, granulocyte differentiation-inducing energy is maintained in the biosynthesis of GM3 by Lc3Cer synthase (beta1→3 N-acetyltransferase), and granulocyte differentiation-inducing energy is maintained in the biosynthesis of GM3 by GM3 synthase (alpha2→3 N-acetyltransferase)(Nakamura. M. et al, J. Biol, Chem. 1992). This study is aimed at clarifying the importance of gene activation and regulatory mechanisms in the development of glycosyltransferase protein. The Lc3Cer synthase is modulated by a single antibody HF12, which is recognized by GlcNAcbeta1→3Gal. Analysis of the properties of GlcNAcbeta1→ 3Ga1 and the occurrence of Lc3Cer characteristic. The antibody is now developed using Lc3Cer synthase. In the second place, GM3 synthetic enzyme was used to detect the 150bp DNA sequence of GM3 synthetic enzyme. PCR method was used to detect the 150bp DNA sequence of GM3 synthetic enzyme. Now we are building the discovery system and analyzing the similarities and differences between GM3 synthase and the catalytic enzyme reactions in detail.