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シアリルルイス-X構造の高次認識に必須なコア糖蛋白質のcDNAクローニング

唾液酸 Lewis-X 结构高阶识别所必需的核心糖蛋白的 cDNA 克隆

基本信息

批准号：
09240229
负责人：
中村充
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09240229/
关键词：
E-セレクチンシアリルルイスX B細胞分化 E-セレクチン糖蛋白リガンド gp150

项目摘要

シアリルルイス-X(sLe^X)構造の高次認識には、その糖鎖構造が特定コア糖蛋白質上に発現していることが必須と推定されている。しかし、その特定コア糖蛋白質としてはE-セレクチンの場合マウスのESL-1以外報告されていない。我々は、ヒトのプレB細胞性白血病細胞株を用いて、ヒトのE-セレクチンリガンド糖蛋白質の同定を試み、それをコードするcDNAをクローニングすることを目標に掲げた。セレクチンリガンド糖鎖は、いくつかの糖転移酵素によって生合成され発現する。今までは、特にFucT-VIIこそが重要なキ-ステップであると信じられて来た。しかし、我々はセレクチンリガンドの発現制御がFucT-VIIによってではなく、O-glycanのコア2と呼ばれる基本構造を合成するN-アセチルグルコサミン転移酵素(Core2GnT)によってなされていることを明らかにした。ヒトBリンパ球系細胞では、特に未熟な分化段階のB細胞性白血病細胞株にのみsialyl-Le^Xが発現していて、E-セレクチンのみに依存する細胞接着を示す。その表面膜上にあるsialyl-Le^Xは殆ど唯一の150kDaの糖蛋白質(gp150)上に発現している。このsialyl-Le^Xに対する抗体の反応性はO-結合型糖鎖の生合成をブロックすることにより消失し、またホルボールエステル処理することによって同抗体の反応性は経時的に消失した。このgp150こそがE-セレクチンの糖蛋白質性リガンドであることが、放射標識E-セレクチンがカルシウム依存性に結合することから判明した。現在、既に調製済みのセレクチン-免疫グロブリン定常領域融合蛋白質を固相化したアフィニティーカラムなどを用いて、プレーB白血病細胞株の膜画分からgp150を精製中である。

A high-level understanding of the structure of the sugar chain X(sLe^X) is necessary for the development of specific sugar proteins. In addition to ESL-1, E-C-C-C We have been trying to identify and identify the glycoprotein in B cell leukemia cell lines, and to identify the cDNA sequence in B cell leukemia cell lines. The sugar chain of the enzyme is produced in the presence of a sugar chain. This is the first time that I've ever seen a woman. In this paper, we propose to synthesize the basic structure of FucT-VII, O-glycan and C2GnT, and to control the development of FucT-VII. The B-cell lineage cells are cells that are specifically developed in immature B-cell leukemia cell lines and are dependent on E-lymphocyte. The sialyl-Le^X protein appears on the surface of the membrane as a unique 150kDa glycoprotein (gp150). This sialyl-Le^X antibody is resistant to O-binding glycoproteins and disappears when treated with anti-DNA. The E-protein glycoprotein properties of the E-protein are determined by the binding of the E-protein to the E-protein. Now, both the modulation of the immune system and the steady state domain fusion protein are solid-phase, and the membrane separation of B leukemia cell lines is carried out.