ヒトプレB細胞分化におけるコア2GlcNac転移酵素遺伝子の転写制御機構の解明

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プレB細胞表面にはシアリルルイス-X(sLeX)糖鎖抗原が存在し、血管内皮細胞へのE-セレクチン依存性細胞接着に関与している。sLeX発現は糖転移酵素を通して糖鎖遺伝子の間接支配を受けるが、プレB細胞の場合、表面sLeX発現レベル調節の律速酵素は末端のフコース転移酵素FucT-VIIではなく、コア構造を作るコア2GlcNAc転移酵素(C2GnT)である。さらにsLeX糖鎖構造は分子量150kDaの特定糖蛋白質(gp150)上のO-グリコシド糖鎖末端に好んで生合成される。本研究で、我々はさらに次のことを明らかにした。1.C2GnTにょるsLeX発現レベル調節は、扁桃由来のB細胞活性化においても示された。2.プレB細胞分化におけるC2GnT転写調飾には、Spl family、GATA、NF-IL6などの転写因子群、とりわけSp2とGATA3が関与していることが示唆された。すなわち、(i)C2GnTのダウンレギュレーションに先だって、Sp2発現が一過性に増加する。さらにそのあとGATA3発現がアップレギュレーションする。(ii)ルシフェラーゼリポーター遺伝子を使った実験から、C2GnT遺伝子上流の転写調節領域に存在する、三つのTATAボックスのうち、転写開始点に一番近い-182のTATAを含む部分欠失ミュータントが、最も高い一過性転写活性を示した。(iii)TATA(-182)の近傍に存在する、Sp gene familyまたはGATA結合コンセンサス部位に、人工的変異を挿入することによって、一過性転写活性が1O倍以上になる。(iv)ゲルシフトアッセイでSp gene family及びGATA3の結合が示されている。これらからSpl gene family及びGATA3が負の調節因子となっていることが判明した。以上の結果は欧文誌に発表済みないし発表予定である。