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コア2GlcNAc転移酵素遺伝子の転写調節機構の研究

核心2GlcNAc转移酶基因转录调控机制研究

基本信息

批准号：
12033215
负责人：
中村充
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12033215/
关键词：
Sialyl-Le^X E-Selectin Sp Gene Family GATA Transcription Factor O-linked Glycoprotein Cell Adhesion Sialomucin family

项目摘要

ヒトプレB細胞表面にはシアリルルイス-X(sLe^X)糖鎖抗原が強発現し、細胞接着などに関与しているものと考えられている。プレB細胞表面sLe^X抗原構造は、糖脂質にもN-グリコシド型糖鎖にも載っておらず、O-グリコシド型糖鎖だけに発現する。しかもプレB細胞の場合、同じO-型糖鎖といっても、ほとんど唯一の特定糖蛋白質(分子量150kDa;gp150)上のO-型糖鎖末端に好んで発現し、表面sLe^X発現レベルは、コア2GlcNAc転移酵素(C2GnT)の律速調節を受けている。我々は、律速酵素C2GnTの転写調節機構の研究などを進め、次のことを明らかにした。1.このgp150は、Pasteurella haemolytica由来のO-sialoglycoproteinendopeptidase処理によって、抗sLe^Xモノクローナル抗体反応性が消失したことから、シアル酸を末端に持つO-型糖鎖に富んだシアロムチンタイプの糖蛋白質分子であることが示唆された。2.プレB細胞分化におけるC2GnTの転写調節に関わる因子として、Sp1 gene family、GATA、NF-IL6などの転写因子群、とりわけSp2とGATA3が関与していることが、ルシフェラーゼアッセイ・ゲルシフトアッセイなどにより示唆された。とりわけSp1 gene family及びGATA3が負の調節因子となっていることが判明した。3.抗sLe^Xモノクローナル抗体を結合させたプロテイン-Gを用いてプレB細胞株NALL-1膜画分からgp150を調製し、ペプチドフラグメントを精製してアミノ酸一次構造を解析したところ、あるシアロムチンタイプの糖蛋白質分子であることが判明した。さらにそのシアロムチンタイプの糖蛋白質をコードする遺伝子をアンチセンス方向にドライブして、プレB細胞sLe^X高発現株に発現させたところ、sLe^X抗原発現が有意にダウンレギュレーションし、E-セレクチンを介する細胞接着性が著しく低下した。

The expression of glycophylloprotein X (sLe ^X) on the surface of B cells is strongly associated with cell adhesion. The structure of sLe ^X antigen on the surface of B cells is due to the development of N-type and O-type glycoproteins in glycolipids. In the case of Shikamopley B cells, the same O-type sugar lock is found at the end of the O-type sugar lock on the only specific glycoprotein (molecular weight 150 kDa; gp150), the surface sLe ^X is found on the surface, and the rate regulation of the cona2GlcNAc transferase (C2GnT) is affected. A Study on the Regulation Mechanism of C2 GnT Gene in Human Brain Tissue 1. O-sialoglycoproteinase treatment of the origin of this protein, Pasteurella haemolytica, and anti-sLe ^X antibody lost its reactivity. 2. The factors involved in the regulation of C2 GnT gene expression in B cell differentiation include: Sp1 gene family, GATA, NF-IL6 gene family, Sp2 and GATA3 gene family, GATA gene family and NF-IL6 gene family. Sp1 gene family and GATA3 are negative regulators. 3. Anti-sLe ^X antibody binding to the protein protein-G in the B cell line NALL-1 membrane protein 150 modulation, purification, acid primary structure analysis, determination In addition, the expression of the glycoprotein in B cells was significantly lower than that in E cells, and the expression of the antigen was significantly lower than that in E cells.