胃粘膜上皮細胞type2シクロオキシゲナーゼの発現調節に関する分子生物学的検討

胃粘膜上皮细胞2型环氧合酶表达调控的分子生物学研究

• 批准号: 05670473
• 负责人: 坂本 長逸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670473/
• 关键词: 胃粘膜; 胃粘液上皮細胞; type2シクロオキシゲナーゼ遺伝子; シクロオキシゲナーゼ活性; 胃潰瘍; 増殖因子

(1)マウスtype2シクロオキシゲナーゼに対する特異抗体の作製-type2シクロオキシゲナーゼのC端アミノ酸フラグメントを合成し、ラビットに免疫してポリクローナル抗体を作製した。ELISAでの検討では1万倍希釈にてペプチドフラグメントを認識しうる特異抗体であり、現在、ウエスタンブロット、免疫染色が可能か否か検討中である。(2)マウス胃粘膜粘液上皮細胞の単層培養系の確立-プライマリーカルチャー系の確立はきわめて困難であり、現在、温度感受性SU40LT抗原を用いた、トランスジェニックマウスから、上皮細胞の培養系を得るべく努力している。(3)マウスにおける実験潰瘍モデルの作成と、シクロオキシゲナーゼ発現の検討-マウス胃漿膜下に20%酢酸を注入し実験胃潰瘍を作製した。組織学的には潰瘍作製後2日〜5日目が活動期であり、10日〜20日目が治療期で30〜40日で瘢痕化した。実験潰瘍発症直後より40日目までtype1シクロオキシゲナーゼ遺伝子発現はノーザン分析でまったく変化を認めなかった。一方、ノーザン分析ではtype2シクロオキシゲナーゼの発現も認めないがpolymerase chaine reaction法を用いてmRNAの半定量も行うと、type2シクロオキシゲナーゼ遺伝子は、潰瘍の急性期に一致してその発現量が増加した。現在シクロオキシゲナーゼ活性及び特異抗体を用いたtypeシクロオキシゲナーゼ蛋白の発現について、解析中である。

(1) マ ウ ス type2 シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ に す seaborne る - the specific antibody の cropping type2 シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ の C end ア ミ ノ acid フ ラ グ メ ン ト を synthetic し, ラ ビ ッ ト に immune し て ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody を cropping し た. Beg で ELISA で の 検 は 10000 times when 釈 に て ペ プ チ ド フ ラ グ メ ン ト を know し う る specific antibodies で あ り, now, ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト, immune dyeing が may か no か 検 beg in で あ る. (2) マ ウ ス gastric mucosal epithelial cells of the mucous の 単 layer culture establishment is の プ ラ イ マ リ ー カ ル チ ャ ー is の establish は き わ め て difficult で あ り, now, temperature sensibility SU40LT antigen を with い た, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス か ら, epithelial cells の training department を る べ く efforts し て い る. (3) マ ウ ス に お け る be 験 ulcer モ デ ル の と, consummate シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ 発 の now beg - マ 検 ウ ス gastric subserosal に 20% boggy acid を injection し be 験 gastric ulcer を cropping し た. Histological に が ulcer 2 to 5 days after treatment が active stage であ 10 days to 20 days が treatment stage で30 to 40 days で scarring た. Be 発 験 ulcer disease straight after よ り 40 day eye ま で type1 シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ heritage 伝 son 発 now は ノ ー ザ ン analysis で ま っ た く variations change を recognize め な か っ た. One party, ノ ー ザ ン analysis で は type2 シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ の 発 も now recognize め な い が polymerase chaine を reaction method with い て mRNA の semi-quantitative も line う と, type2 シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ heritage 伝 は, ulcer の acute に consistent し て そ の 発 now quantity が raised し た. Now シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ activity and を び specific antibody with い た type シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ protein の 発 now に つ い て, parsing で あ る.