プロテアーゼインヒビター様ドメインをもつ新規EGF様蛋白質の機能解析

具有蛋白酶抑制剂样结构域的新型 EGF 样蛋白的功能分析

基本信息

  • 批准号:
    08265238
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3.2万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

(1)新規cDNAがコードする蛋白質のEGF様増殖活性の検討1)新規EGF様蛋白質cDNAを形質導入したNIH線維芽細胞のクローン化2)新規EGF様蛋白質を高発現するクローン化NIH線維芽細胞の大量培養及び新規EGF様蛋白質の精製。私共は既に大腸菌よりGST融合蛋白質を得ており、この蛋白質よりEGFドメインとfollistatinドメインに対するモノクローナル抗体を作成している。モノクローナル抗体を用いて新規EGF様蛋白質TRが高発現するNIH線維芽細胞培養液上清よりTRの精製を試みている。3)精製EGF様蛋白質の生物活性の検討EGF受容体を過剰発現する細胞株を用いたEGF受容体リン酸化能の検討。TR高発現NIH細胞の培養液上清を用いてミンク肺上皮細胞、A172glioblastoma細胞でerbB2のリン酸化を認めた。一方、erbB2,erbB3発現細胞でも、必ずしもTRを含む培養液はerbB2をリン酸化せず、従ってTRの受容体が存在する細胞においてerbB2のリン酸化が観察されるものと思われた。4)NIH線維芽細胞培養液上清のDNA合成能の検討。TRを含む培養液上清はA172細胞や、ミンク肺上皮細胞でDNA合成能を認めた。(3)胎児、新生児、成人マウスにおける組織分布のノーザン分析、ウエスタン分析による検討。TRはヒト成人組織では大脳、骨格筋、胃粘膜線維芽細胞に高発現する。マウス胎児では胎生11日目より発現が観察される。免疫染色では中枢神経シュワン細胞や皮膚基底膜に免疫活性を認めた。
(1)Discussion on the EGF-like proliferative activity of the new regulatory cDNA library protein 1) Qualitative introduction of the new regulatory EGF-like protein cDNA into NIH line bud cells for cloning 2) Mass culture of NIH line bud cells and purification of the new regulatory EGF-like protein for high-level discovery of the new regulatory EGF-like protein. The protein was prepared from E. coli GST fusion protein, EGF protein and follistatin protein. A new EGF protein TR is highly expressed in NIH line cell culture supernatant. 3)Study on Biological Activity of Purified EGF Protein Study on EGF Receptor Acidification Activity in Cell Lines TR highly expressed NIH cell culture supernatant was used to detect erbB2 in lung epithelial cells and A172 glioblastoma cells. The erbB2, erbB3-producing cells were detected in the presence of erbB2-producing cells and receptors. 4) Evaluation of DNA synthesis in supernatant of NIH line cell culture medium. TR culture supernatant was used to detect DNA synthesis in A172 cells and lung epithelial cells. (3)Fetal, neonatal, adult tissue distribution analysis, tissue analysis TR is highly developed in adult tissues such as large intestine, bone tendon and gastric mucosa. The fetus was born on the 11th day of the birth. Immunostaining is used to identify the immune activity of central nervous system cells and basal membrane of skin.

项目成果

期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Matsuda Kouhei: "Effects of growth factors and yut hormones on proliferation of primary cultured gastric mucous cells of guinea pig" J of gastroenterology. 31・4. 498-504 (1996)
松田耕平:“生长因子和yut激素对豚鼠原代培养胃粘液细胞增殖的影响”胃肠病学杂志31・4(1996)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Mizuno Hisashi: "Induction of cyclooxygehsel 2 in gastric mucosal lesions and its inhibition by the specific antagonist delays healing in mice" gastroenterology. 112・2(In press). (1997)
Mizuno Hisashi:“胃粘膜损伤中环氧基gehsel 2的诱导及其通过特定拮抗剂的抑制延迟了小鼠的愈合”胃肠病学112·2(出版中)。
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    0
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  • 通讯作者:
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  • 通讯作者:
    相澤 良夫

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    $ 3.2万
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  • 批准号:
    05670473
  • 财政年份:
    1993
  • 资助金额:
    $ 3.2万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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  • 财政年份:
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  • 资助金额:
    $ 3.2万
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    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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知道了