胃粘液上皮細胞増殖因子に関する分子細胞生物学的検討

胃粘液上皮细胞生长因子的分子细胞生物学研究

• 批准号: 06670550
• 负责人: 坂本 長逸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670550/
• 关键词: 胃粘液上皮細胞; 増殖因子; EGF

1.モルモット胃粘液上皮細胞培養液の生物活性の検討-CHO細胞にヒトEGF受容体cDNAをトランスフェクトしたCHO・ER細胞を用い、〔^3H〕チミジンの取り込み、及びEGF受容体チロシンリン酸化能を検討したところ、コンデションメディウム(CM)にはチミジンの取り込み促進作用、EGF受容体チロシンリン酸化能を認めた。そこでCMをヘパリンセファロースカラムにて、ヘパリン縮合物質と、そうでない増殖因子とに分離し、CHO・ER細胞でチミジンの取り込みを検討したところ、カラムを通過したヘパリン非縮合溶出液中にCHO・ER刺激活性を認めた。この活性はTGFα中和抗体で中和され、濃縮後、TGFα抗体を用いたウェスタンブロット法によってTGFαがCM中に存在することを確認した。ヘパリンに縮合した溶出液中にもBT3fibroblastに対する増殖促進活性を認め、このCM中にはTGFαとそれ以外の増殖因子も分泌されることが確認された。胃粘液上皮細胞におけるEGF,TGFα,AR及びHBEGFmRNA発現量のノーザンブロット法による解析-報告された遺伝子配列を基にマウス唾液腺、ヒト大腸癌細胞株及びヒト単球より逆転写酵素を用いたpolymerase chane reaction(RT-PCR)法によりそれぞれの増殖因子cDNAを得た。モルモット胃粘液上皮細胞には、TGFαmRNAの発現を認め、他の増殖因子については現在ノーザンブロットにて解析中である。

1. Study on the biological activity of culture medium of gastric mucoid epithelial cells-CHO cell culture medium containing EGF receptor cDNA, CHO ER cell culture medium containing EGF receptor, CHO ER cell culture medium containing EGF In addition, CHO ER stimulation activity was detected in CHO ER cells by using a non-condensed extract. This activity is confirmed by neutralizing and concentrating TGFα antibodies. BT3fibroblast in the extract was identified as a growth promoter, and TGFα in the extract was identified as a growth promoter Expression of EGF,TGFα,AR and HBEGF mRNA in gastric mucoid epithelial cells was analyzed by polymerase chain reaction(RT-PCR). The expression of TGFαmRNA in gastric mucus epithelial cells and the analysis of its growth factors

项目成果

C.Sakamoto,et.al.: "EGF stimulates both cyclooxygenase activity and all proliferation of cultured guineapiggaetric mucous cells." J.Gastoenterol. 29. 73-76 (1994)

C.Sakamoto 等人：“EGF 刺激环氧合酶活性和培养的豚鼠粘液细胞的所有增殖。”