胃粘液上皮細胞増殖因子に関する分子細胞生物学的検討

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1.モルモット胃粘液上皮細胞培養液の生物活性の検討-CHO細胞にヒトEGF受容体cDNAをトランスフェクトしたCHO・ER細胞を用い、〔^3H〕チミジンの取り込み、及びEGF受容体チロシンリン酸化能を検討したところ、コンデションメディウム(CM)にはチミジンの取り込み促進作用、EGF受容体チロシンリン酸化能を認めた。そこでCMをヘパリンセファロースカラムにて、ヘパリン縮合物質と、そうでない増殖因子とに分離し、CHO・ER細胞でチミジンの取り込みを検討したところ、カラムを通過したヘパリン非縮合溶出液中にCHO・ER刺激活性を認めた。この活性はTGFα中和抗体で中和され、濃縮後、TGFα抗体を用いたウェスタンブロット法によってTGFαがCM中に存在することを確認した。ヘパリンに縮合した溶出液中にもBT3fibroblastに対する増殖促進活性を認め、このCM中にはTGFαとそれ以外の増殖因子も分泌されることが確認された。胃粘液上皮細胞におけるEGF,TGFα,AR及びHBEGFmRNA発現量のノーザンブロット法による解析-報告された遺伝子配列を基にマウス唾液腺、ヒト大腸癌細胞株及びヒト単球より逆転写酵素を用いたpolymerase chane reaction(RT-PCR)法によりそれぞれの増殖因子cDNAを得た。モルモット胃粘液上皮細胞には、TGFαmRNAの発現を認め、他の増殖因子については現在ノーザンブロットにて解析中である。