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胃粘膜防御機序に関する研究-胃上皮細胞増殖因子cDNAクローニング-

胃粘膜防御机制研究-胃上皮细胞生长因子cDNA克隆-

基本信息

批准号：
07273243
负责人：
坂本長逸
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273243/
关键词：
増殖因子胃粘膜上皮細胞 EGF 分子生物学

项目摘要

1.胃上皮細胞増殖因子cDNAのクローニングRT-PCR法により得た新たなcDNAフラグメントをプローブとして種々のcDNAライブラリーをスクリーニングし、人大脳cDNAライブラリーより全長約1900baseから成るcDNAのクローニングに成功した。得られたcDNAは2種類のスプライスバリアントから成り、アミノ酸配列はともにN端側よりシグナルペプチド、2ヶ所のfollistatin様構造、EGF様構造、膜貫通ドメイン、細胞質ドメインが予想された。私共は、368個と418個のアミノ酸から成ると予想されるこれら蛋白質を仮にTRa,TRbと命名した。2. GST-TR, GST-TREGFの作成とモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体の作製GSTとの融合蛋白質GST-TR, GST-TREGFドメインを作製し精製後、家兎に免疫し、ポリクローナル抗体を作製した。又、マウスに免疫ののち、EGFドメインに対するモノクローナル抗体を作製した。3. TRa, TRb, cDNAのCOS7細胞への一過性導入及びNIH3T3細胞への安定的導入TRの精製及び培養液上清の生物活性の測定のためTRa, TRb, cDNAをSRα発現ベクターに構築し、COS7細胞、NIH3T3細胞にトランスフェクトした。TRa, TRb, cDNAをプローブとしてノーザン分析すると、両cDNAはCOS7, NIH3T3細胞にそれぞれ導入され、mRNAを高発現することが示された。細胞を可溶化し、モノクローナル抗体で免沈後、ポリクローナル抗体でウェスタンブロットすると、TRaは65kDa, TRbは70kDaの蛋白として観察された。そこで現在、COS7培養液上清及びクローン化したNIH-TR細胞培養液上清のEGF受容体リン酸化能、erbB2リン酸化能を検討中である。

1. A novel cDNA for gastric epithelial growth factor was successfully obtained by RT-PCR with a total length of about 1900base. The obtained cDNA is composed of two types of Splasmis Balianent, an aminic acid sequence on the N-terminal side of the N-terminal side, a folistatin-like structure of two types, an EGF-like structure, a membrane-penetrating membrane, and a cytoplasmic membrane. A total of 368, 418, and 100 proteins were identified. 2. GST-TR, GST-TREGF fusion protein In addition, it is necessary to control the immune system. 3. TRa, TRb, cDNA were transiently introduced into COS7 cells and stably introduced into NIH 3T3 cells. TRa, TRb, cDNA were purified and the biological activity of culture supernatant was measured. TRa, TRb, cDNA are introduced into COS7, NIH 3T3 cells, and mRNA is highly expressed. Cell solubilization, protein expression, protein expression, TRa 65kDa, TRb 70kDa protein expression The EGF receptor acidification and erbB2 acidification in the supernatant of COS7 culture medium and NIH-TR cell culture medium were studied.