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ラット遠位大腸単離上皮細胞のエンドセリン受容体の同定とそのCl^-分泌に対する作用

大鼠远端结肠离体上皮细胞内皮素受体的鉴定及其对Cl^-分泌的影响

基本信息

批准号：
05670467
负责人：
上田俊二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670467/
关键词：
大腸上皮輸送エンドセリンパッチクランプ実験法 K電流 Cl電流

项目摘要

1.大腸粘膜上皮細胞のエンドセリン受容体の種類の同定:ラット遠位側大腸を切除し、実体顕微鏡下に筋層を剥離した大腸粘膜から凍結切片を作製しオートラジオグラフィーを行った。^<131>I標識エンドセリン(以下ETと略)1,2,3を作用させたオートラジオグラフィーにより大腸粘膜上皮細胞にET-1,2,3それぞれの結合部位が存在していることが明らかとなった。そこでET受容体の種類を明らかにするため、ET-A受容体に対する拮抗的阻害剤FR-139177、およびET-B受容体に対する拮抗的阻害剤IRL-1038存在下における^<131>I-ET-1,2,3,によるオートラジオグラフィーを行った結果大腸粘膜上皮細胞にはET-A,ET-B受容体が共に存在していた。2.パッチクランプ・全細胞記録法による研究:ラット遠位側大腸を筒状に切除し、大腸内部にディスパーゼ溶液をみたし、用手法にて外側から圧迫を繰り返し、大腸粘膜上皮を粘膜下層より剥離脱落させることにより細胞を単離し位相差顕微鏡下にパッチクランプ・全細胞記録法による実験を行った。その結果大腸粘膜上皮細胞はET-1刺激により、K^+とCl^-電流の増加と言う反応を示した。各イオン電流の同定は溶液のイオン組成を変化させた時の平衡電位のシフトにより行った。これらの電流増加は細胞内Ca^<2+>濃度を低くたもっても、ETにより誘発されることから、この電流増加の機構はCa^<2+>濃度非依存性であることが明らかとなった。

1. Colorectal mucosa epithelial cells and receptor types are the same: distal large intestine excised, in vivo microscopically excised muscle layer, large intestine mucosa frozen section prepared. <131>The binding sites of ET-1, 2 and 3 in the epithelial cells of large intestine mucosa are present. In the presence of FR-139177 and IRL-1038, the antagonistic inhibitor FR-139177 and IRL-1038 against <131>ET-A and ET-B receptors, respectively, were found to exist in both ET-A and ET-B receptors. 2. Whole cell recording method research: distal large intestine cylindrical resection, large intestine inner part of the solution, manual lateral pressure pressure return, large intestine mucosa epithelium submucosa peeling off, cell separation under microscope Whole cell recording method research. As a result, large intestine mucosa epithelial cells responded to ET-1 stimulation, K^+ and Cl^-currents increased, and the response was shown. The equilibrium potential of the solution changes when the current is constant. The mechanism of current increase is Ca <2 +> concentration-independent.