エンドセリン変換酵素の多様性と生化学的特性解析

内皮素转化酶的多样性和生化特征

• 批准号: 05671852
• 负责人: 高岡 昌徳
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka University of Pharmaceutical Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671852/
• 关键词: エンドセリン; ビッグエンドセリン; エンドセリン変換酵素; エンドペプチダーゼ-2; プロテアソーム

1.エンドセリン変換酵素(ECE)活性を有する膜結合型金属プロテアーゼの同定ラットの種々組織から調整した膜分画のECE活性を測定したところ、腎臓は他の組織に比べてかなり高い比活性値を示した。そこで、本研究では腎臓のECEの諸性質について調べた。膜可溶化分画をゲル濾過カラムに添加した場合、ECE活性は分子量約450kDa(HMW分画)と約150kDa(LMW分画)の位置に認められた。HMW分画の金属プロテアーゼはアクチノニンにより阻害されたが、ホスホラミドン及びケラトルファンにより影響を受けなかった。一方、LMW分画の金属プロテアーゼはアクチノニン、ホスホラミドン及びケラトルファンにより阻害された。また、両分画の金属プロテアーゼは血管内皮細胞や肺で同定されたECEのそれとは異なっていた。更に、HMW分画の金属プロテアーゼの諸性質はラット腎臓に存在するエンドペプチダーゼ-2のそれに極めて類似していることから、エンドペプチダーゼ-2を精製してECE活性の有無について検討を加えた。その結果、エンドペプチダーゼ-2は変換率は低いもののビッグエンドセリン-1(Big ET-1)からエンドセリン-1(ET-1)を生成することが明らかとなった。2.Big ET-1に対するプロテアソームの作用ET-1のC末端側3個のペプチドを含む蛍光合成基質(suc-lle-lle-Trp-MCA)がプロテアソームにより加水分解されることから、当該の年度には精製したプロテアソームがbig ET-1に作用して実際にET-1を生成するかどうか調べた。しかし期待に反して、プロテアソームはbig ET-1及びET-1分子内のいずれのペプチド結合も切断しなかった。

1. The activity of ECE enzyme (ECE) is a membrane-bound metal-containing metal-containing enzyme. The ECE activity was determined by adjusting the membrane separation, and the specific activity of the kidney tissue was higher than that of the kidney tissue.そこで、This study is based on the various properties of kidney 蓓のECE and について Adjustment べた. In the case where membrane solubilization and filtering are added, the ECE activity can be determined at the molecular weight of about 450kDa (HMW) and about 150kDa (LMW). HMW divided metal parts , ホスホラミドン and びケラトルファンにより are influenced by けなかった. On one side, LMW divides the metal pipes, the metal pipes, the metal pipes, and the metal pipes to block them.また、両分画のmetalプロテアーゼはvascular endothelial cellsやpulmonaryで同定されたECEのそれとはdifferentなっていた. More details, HMW divided metal プロテアーゼの various properties はラットkidōに existence するエンドペプチダーゼ-2のそれに极めて is similar to していることから, エンドペプチダーゼ-2をrefined してECE active の有无 について検曒加えた.そのRESULT, エンドペプチダーゼ-2は変Exchange rateはlow いもののビッグエンドセリン-1(Big ET-1)からエンドセリン-1(ET-1)を生することが明らかとなった. 2.Big ET-1 に対するプロテアソームの Effect ET-1のC terminal side 3 のペプチドをcontaining む蛍 photosynthetic substrate (suc-lle-ll e-Trp-MCA) がプロテアソームによりAdd water to decompose されることから, and when the のannual には refined したプロテアソームがbig ET-1's function is the same as the ET-1's generation.しかしLook forward to the anti-して, プロテアソームはbig ET-1 and ET-1 intramolecular のいずれのペプチドcombine and cut しなかった.

项目成果

Kazuhiro,Hisaki: "Enolothelium-independent pressor effect of big endothelin-1 and its inhibition by phosphoramidon in rat mesenteric artery" Eur.J.Pharmacl. 241. 75-81 (1993)

Kazuhiro,Hisaki：“大鼠肠系膜动脉中大内皮素-1 的不依赖于内皮细胞的升压作用及其受磷酰胺的抑制”Eur.J.Pharmacl。

Kazuhiro,Hisaki: "Pifferences in potency of big enclothelim-1 induced pressor action in rat isalated perfused mesenterie artery hndquarter and lung" Life Sci.54. 275-280 (1994)

Kazuhiro，Hisaki：“大 enclothelim-1 在大鼠离体灌注肠系膜动脉下肢和肺中诱导升压作用的效力差异”Life Sci.54。