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エンドセリン変換酵素の生化学的研究と血圧調節機構の研究

内皮素转换酶的生化研究及血压调节机制研究

基本信息

批准号：
04263208
负责人：
木村定雄
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

[目的]本研究では、(1)ET-1,ET-2の生合成経路の解析とそのET変換酵素の特性および構造の解析すること、一方、(2)新しい心血管作動性物質を検索し、構造解析を行うとともに、その作用機序を解析することを目的とした。[結果](1)ETの生合成経路とET変換酵素の解析:これまでにET-1のcDNA構造解析により、ET-1前駆体から、まず中間体big ET-1が産生し、次にET-1変換酵素により21残基のET-1ができるという生合成経路を提唱した。実際に内皮細胞培養上清の解析より、その生合成経路が正しいことを示し、さらに、big ET-1はET-1の約100分の1の収縮活性しか持たず、酵素的変換は生理的に重要な意義を持つことを明らかにしてきた。本研究では、(i)ET-1を産生する内皮細胞、副腎髄質、肺、脳を用いて、ET変換酵素の精製および特性解析を試み、ET変換活性を持つ酵素の系統的解析を行い、ET変換活性をもつ酸性プロテアーゼ(カテプシンD)の単離に成功したが生理的酵素ではなかった。一方、(ii)内皮細胞に膜結合型中性金属プロテアーゼの存在を検出し、in vivoおよびin vitroで金属プロテアーゼ阻害剤ホスホラミドンにより強力に阻害され、big ETによる血圧上昇を抑制することを明かにした。(iii)ET-2産生細胞(腎由来腫瘍)の生合成経路およびET-2変換酵素の特性の解析から、ET-2変換酵素と内皮細胞由来のET-1変換酵素は同一あるいは非常に似た酵素であることが分かった。

[Purpose] This study is to conduct (1) analysis of the biosynthetic pathways of ET-1 and ET-2 and analysis of the characteristics and structure of ET-replacement enzymes. , one party, (2) New cardiovascular action substance を検SO し, structural analysis を row うとともに, その action mechanism を analysis することを purpose とした. [Results] (1) Analysis of ET biosynthetic pathway and ET transformation enzyme: analysis of cDNA structure of ET-1, ET-1 pre-body, and intermediate big ET-1 is produced, and the ET-1 enzyme is replaced with 21 residues, and the ET-1 is produced and synthesized. Analysis of endothelial cell culture supernatant, その生综合経路が正しいことをshowし, さらに, big ET-1 has approximately 100 points of contraction activity, enzyme replacement, and physiological importance. In this study, (i) ET-1 is produced and used in endothelial cells, accessory kidneys, lungs, and lungs, and the characteristics of ET-1-replacement enzymes are analyzed and tested, and ET-replacement enzymes are reactivated. Analysis of the enzyme system that maintains the propertiesーゼ(カテプシンD)の単に成したがphysiological enzyme ではなかった. On the one hand, (ii) endothelial cells membrane-bound neutral metal プロテアーゼのexistent 検出し, in vivo およびinでmetal プロテアーゼ扤ホスホラミドンによりstrong にblocking され、big ETによるblood pressure riseをsuppressionすることを明かにした. (iii) Analysis of the biosynthetic route of ET-2-producing cells (tumor due to kidney) and the characteristics of ET-2 transforming enzyme, E T-2 replacement enzyme and endothelial cell origin are the same as ET-1 replacement enzyme and are very similar to each other.