权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

エンドセリン変換酵素の生化学的研究と血圧調節機構の研究

内皮素转换酶的生化研究及血压调节机制研究

基本信息

批准号：
04263208
负责人：
木村定雄
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

[目的]本研究では、(1)ET-1,ET-2の生合成経路の解析とそのET変換酵素の特性および構造の解析すること、一方、(2)新しい心血管作動性物質を検索し、構造解析を行うとともに、その作用機序を解析することを目的とした。[結果](1)ETの生合成経路とET変換酵素の解析:これまでにET-1のcDNA構造解析により、ET-1前駆体から、まず中間体big ET-1が産生し、次にET-1変換酵素により21残基のET-1ができるという生合成経路を提唱した。実際に内皮細胞培養上清の解析より、その生合成経路が正しいことを示し、さらに、big ET-1はET-1の約100分の1の収縮活性しか持たず、酵素的変換は生理的に重要な意義を持つことを明らかにしてきた。本研究では、(i)ET-1を産生する内皮細胞、副腎髄質、肺、脳を用いて、ET変換酵素の精製および特性解析を試み、ET変換活性を持つ酵素の系統的解析を行い、ET変換活性をもつ酸性プロテアーゼ(カテプシンD)の単離に成功したが生理的酵素ではなかった。一方、(ii)内皮細胞に膜結合型中性金属プロテアーゼの存在を検出し、in vivoおよびin vitroで金属プロテアーゼ阻害剤ホスホラミドンにより強力に阻害され、big ETによる血圧上昇を抑制することを明かにした。(iii)ET-2産生細胞(腎由来腫瘍)の生合成経路およびET-2変換酵素の特性の解析から、ET-2変換酵素と内皮細胞由来のET-1変換酵素は同一あるいは非常に似た酵素であることが分かった。

[Objective] The purpose of this study is to: (1) analyze the biosynthesis pathway of ET-1 and ET-2, and analyze the characteristics and structure of ET-1 and ET-2. [Results](1)ET biosynthesis pathway and ET converting enzyme analysis: ET-1 cDNA structure analysis, ET-1 precursor analysis, ET-1 intermediate big ET-1 production, ET-1 converting enzyme analysis, ET-1 21 residues analysis, ET-1 biosynthesis pathway. In fact, the supernatant of endothelial cell culture was analyzed, and the biosynthetic pathway was positive. In the past, large ET-1 and ET-1 had about 100 minutes of contraction activity. The change of enzyme had physiological significance. In this study,(i)ET-1 production in endothelial cells, pararenal plasma, lung, kidney, and liver, purification and characterization of ET-converting enzymes, analysis of enzyme system for ET-converting activity, isolation of acid and liver, and successful isolation of physiological enzymes were investigated. (ii) The presence of membrane-bound neutral metal ions in endothelial cells is detected, in vivo and in vitro, and the metal ions are strongly inhibited, and the increase in blood pressure is suppressed. (iii) Analysis of characteristics of ET-2 converting enzyme and ET-2 converting enzyme in the biosynthesis pathway of ET-2 producing cells (kidney derived tumors).