一つのmRNAから翻訳される二種のフマラーゼアイソザイムの生成機構

从一种 mRNA 翻译产生两种延胡索酸酶同工酶的机制

• 批准号: 05680543
• 负责人: 吉田 匡
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680543/
• 关键词: フマラーゼ; 翻訳調節; アイソザイム; COS細胞での発現

ラットフマラーゼの遺伝子の解析から、5'側非翻訳部にはループ構造形成可能な領域があり、もし、ループが形成されると最初のATGコドンはこのループ内に含まれてしまうことを我々は見出している。しかし、今迄我々の得たcDNAは5'側非翻訳部が非常に短いものばかりであったので、このcDNAと遺伝子とを繋ぎ合わせてループ形成可能なcDNAを構築した。また、最初のATGを欠くものも作成し、これらのDNA断片を真核細胞発現ベクターpSVLに組み込んだ次の三種の発現ベクターを構築した。pSVLRFumML(ループ形成可能な長い5'側非翻訳部を持ちミトコンドリア輸入のシグナルとフマラーゼをコードするもの);pSVLRFumMS(pSVLRFumMLと同じであるがただループ形成ができない);pSVLRFumC(最初のATGを欠くためシグナル配列は除かれており従って細胞質型のフマラーゼしか発現しないと考えられるもの)。これらの発現ベクターをトランスフェクトされたCOS細胞からミトコンドリアと細胞質画分を調製し、それらをSDSPAGEし、さらにイムノブロット法にてどの画分にフマラーゼが発現されているかを検討した。その結果、pSVLRFumML或るいはRFUMMSをトランスフェクトされたCOS細胞では両画分共にフマラーゼが顕著に発現されていた。さらに、二番目のATGの下流に大腸菌のCATを組み込んだ融合DNAをCOS細胞にトランスフェクトさせたところ、このキメラ蛋白質はやはり両画分で発現された。つまりフマラーゼでは一つのmRNAから実際に二種の蛋白質が翻訳されていることの決定的な証拠が得られたことになる。pSVLRFumCをトランスフェクトされた細胞では当然のことながら細胞質型酵素のみ発現されていた。pSVLRFumMLとRFumRSとの比較から、ループ形成された場合ミトコンドリアの発現量が細胞質に較べて減少することが認められた。よって、このループ形成領域が二種のフマラーゼの翻訳調節の鍵を握っているものと推測された。

In the first place, it is possible that the field of information, information, and information may be caused by the formation of the field. The initial ATG may be caused by the formation of the field, which may be caused by the formation of the field. So far, we have been told that the cDNA 5 'non-flip department is very short, so that you can use the cDNA information to make sure that it is possible to cause a cDNA error. There are three kinds of data, namely, the first, the initial ATG, and the eukaryotic cell of the DNA fragment. There are three significant differences in the pSVL system. PSVLRFumML (it is possible that the non-flip part of the machine may be formed in the same way as pSVLRFumML); pSVLRFumMS (in the same way as ATG); and pSVLRFumC (in the first place). It is possible that the non-flip part of the unit may be used in a long time. Do you want to know that there is a difference in the number of COS cells? in this case, you can see that there is a difference between the two parts of the cell. The picture is divided into two parts: the number of cells, the number of cells, the number of cells. The results, the pSVLRFumML or the RFUMMS results show that there are significant differences in the results, the results, the In the second order of ATG, the tissue of CAT was fused with DNA, COS, and the cells of DNA were fused. This is the first time that the two international proteins of the mRNA have been approved by the government. Of course, the cell-type enzyme pSVLRFumC has been found to have a negative effect. The pSVLRFumML RFumRS is better than the other, and the number of cells is lower than that of the control. There are two kinds of information in the field: information, information and information.

项目成果

Kentaro Takahashi: "Integration of porin into the outer mitochondrial membrane through the common import machinery located in contact sites" Biochem.Mol.Biol.Internal.29. 429-434 (1993)

Kentaro Takahashi：“通过位于接触位点的常见输入机制将孔蛋白整合到线粒体外膜中”Biochem.Mol.Biol.Internal.29。

Hideyu Ono: "Transport of prepro-albumin into inverted vesicles prepared from the inner membrane of rat liver mitochondria" FEBS Letters. 318. 273-276 (1993)

Hideyu Ono：“将前原白蛋白转运到由大鼠肝线粒体内膜制备的倒置囊泡中”FEBS Letters。