C型慢性肝炎発症機序の解明と細胞障害性T細胞の確率

阐明慢性丙型肝炎的发病机制和细胞毒性T细胞的可能性

• 批准号: 07457597
• 负责人: 三田村 圭二
• 金额: --
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07457597/
• 关键词: C型肝炎ウィルス; 慢性肝炎; 細胞障害性T細胞; MHC class I拘束性; トランスジェニックマウス

1.トランスジェニックマウスによるC型慢性肝炎発症機序の解明C型肝炎ウィルス(HCV)の芯(cone)をコードする遺伝子を導入したマウスが2系統得られ、HCV core mRNAの発現が確認され、HCV core蛋白の発現をウエスタンブロッテイングおよび蛍光抗体法で検討中である。2.MHC class I拘束性CTLの分離(1)エフェクター細胞(CTL)の分離と標的HCVcore蛋白の同定:HLA-A11拘束性ペプチドの予想モチーフをxVxxxxxx(x)K(9-10アミノ酸残基)とし、HCVのアミノ酸配列なかに存在するHLA-A11拘束性ペプチド(HCV-A11)を10ペプチド合成した。HLA-A2, A11, B35, B46をもつC型慢性肝炎患者の末梢血単核球(PBMC)を分離精製し、各々のHCV-A11ペプチドで刺激し、さらにT細胞性白血病由来株細胞Jarkat細胞(A3, A11, B7, B35, Cw3, Cw4, Bw6)で再刺激し、IL-2添加培養を行い、CTL Assayのエフェクター細胞とした。Jarkat細胞を当該のHCV-A11ペプチドと共に培養し、ペプチド標識を行ない、標的細胞とし、前記エフェクター細胞を加え、5時間Co-cultureし、LDH標識によるCTL assayキットで細胞障害性を検討した。標的細胞に対して細胞障害性を示すCTLが分離され、対応するHCVペプチドとして2種類のHLA-A11拘束性ペプチドCVQREKGGRKとEVILTHPITKが得られた。得られたCTLのクローニングと樹立を行なっている。(2)標的細胞の作製:ヒト肝癌由来培養株細胞HePG2とC型慢性肝炎患者(HLA-A2, A24, B-35, B-54, Cw3, Cw1)の肝生検由来肝組織をHVJを用いて融合し、ハイブリドIMY-4細胞を樹立した。この細胞は継代培養が可能であり、持続的にHCVを産生している。この細胞を標的細胞としてHLA-A2, A24のC型慢性肝炎患者のPBMCからHLA-12およびA24拘束性CTLの樹立を検討中である。

1. ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス に よ る 発 syndrome of chronic hepatitis C machine sequence の interpret hepatitis C ウ ィ ル ス の (HCV) core (cone) を コ ー ド す る posthumous son 伝 を import し た マ ウ ス が 2 system must ら れ, HCV core mRNA の 発 が now confirmed さ れ, HCV The core protein assay shows をウエスタ, ブロッテ, <s:1>, グおよび蛍, グおよび蛍, and the photoantibody method で検 is successful である. 2.MHC class I at CTL の separation (1) エ フ ェ ク タ ー cell (CTL) の HCVcore protein separation と mark の with: HLA - A11 at ペ プ チ ド の to think モ チ ー フ を xVxxxxxx (x) K (9-10 ア ミ ノ acid residue) と し, HCV の ア ミ ノ acid with column な か に exist す る HLA - A11 at home Sex ペプチド(HCV-A11)を10ペプチド synthetic た た. HLA-A2, A11, B35, B46を を を を を isolation and refinement of nuclei (PBMC) from the peripheral blood of patients with chronic hepatitis C, stimulation of each 々 blood HCV-A11ペプチドで nuclei, さらに strain of t-cell leukemia Jarkat cells (A3, A11, B7, B35, Cw3) Cw4, Bw6)で re-stimulation で, IL-2 addition culture を rows of を, CTL Assay <s:1> エフェ タ タ と cells と た た. を Jarkat cells when the の HCV - A11 ペ プ チ ド と に し, total ペ プ チ ド line identification を な い, target cells と し, former record エ フ ェ ク タ ー cells を え, 5 time Co - culture し, LDH identification に よ る CTL assay キ ッ ト で cells handicap of sexual を beg し 検 た. Target cell に し seaborne て cells handicap of sexual を shown す CTL が separation さ れ, 応 seaborne す る HCV ペ プ チ ド と し て 2 kinds の HLA - A11 at ペ プ チ ド CVQREKGGRK と EVILTHPITK が must ら れ た. Set up the を line なって る る る with られたCTL ロ ロ ニ ニ グと グと. (2) : the target cell の cropping ヒ ト origin cultivation strains of liver cancer cell HePG2 と in patients with chronic hepatitis C (HLA - A2, A24-35 B, B - 54, Cw3, Cw1) の raw liver 検 origin liver tissue を HVJ を with い て fusion し, ハ イ ブ リ ド を IMY - 4 cells establish し た. The が 継 generation culture of <s:1> <s:1> cells が 継 may produce て て る る る and 続 held にHCVを. こ の cells を mark と し て HLA - A2, A24 の in patients with chronic hepatitis C の PBMC か ら HLA - 12 お よ び A24 at CTL の set を 検 beg in で あ る.