HCV特異MHC拘束性CTLクローンのHCV組換えワクチニアウィルスによる確立

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C型肝炎ウィルス(HCV)の遺伝子(HCV RNA)がクローニングされているが、なおHCV粒子の分離同定はなされておらず、ヒト、チンパンジー以外の感染系は明らかにされていない。HCVの構造遺伝子(coreおよびenv)のcDNAを組込んだ組換えワクチニアウィルス(Vac-HCV/core-env)を作製して、HCVcoreおよびenv蛋白を発現させ、標的抗原として、HCV特異MHC拘束性CTLクローンを作製する。1組換えワクチニアウィルス(Vac-HCV/core-env)の作製: HCVcDNAと弱毒株ワクチニアウィルスとの相同組換えによりVac-HCV/core-envを作製した。2標的細胞の作製:C型慢性肝炎患者の末梢血リンパ球に^<51>Cr標識を行ない、Vac-HCV/core-envを感染させ、HCV蛋白を発現する標的細胞の作製を検討している。3エフクター細胞(CTL)の作製:C型慢性肝炎患者の末梢血リンパ球を合成HCVcoreおよびenvペプチドで刺激(誘発)し、^3Hチミヂンの取り込みにより、誘発されたリンパ球を選択し、HCV蛋白を認識しているT細胞のクローニングを実施している。4対象患者のHLAの同定:CTLの標的抗原はMHCと結合(MHC拘束性)して標的細胞に表出される。対象患者のHLAを同定する。5今後の計画:特定のHCV抗原蛋白を認識しているT細胞クローンが得られた患者の末梢血リンパ球にVac-HCV/core-envを感染させて標的細胞として、Cr release cytotoxicity assayによりT細胞クローンからCTLを選別して、そのHLAを同定して、MHC拘束性CTLクローンを樹立する。