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HCV特異MHC拘束性CTLクローンのHCV組換えワクチニアウィルスによる確立

使用 HCV 重组牛痘病毒建立 HCV 特异性 MHC 限制性 CTL 克隆

基本信息

批准号：
04670413
负责人：
三田村圭二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

C型肝炎ウィルス(HCV)の遺伝子(HCV RNA)がクローニングされているが、なおHCV粒子の分離同定はなされておらず、ヒト、チンパンジー以外の感染系は明らかにされていない。HCVの構造遺伝子(coreおよびenv)のcDNAを組込んだ組換えワクチニアウィルス(Vac-HCV/core-env)を作製して、HCVcoreおよびenv蛋白を発現させ、標的抗原として、HCV特異MHC拘束性CTLクローンを作製する。1組換えワクチニアウィルス(Vac-HCV/core-env)の作製: HCVcDNAと弱毒株ワクチニアウィルスとの相同組換えによりVac-HCV/core-envを作製した。2標的細胞の作製:C型慢性肝炎患者の末梢血リンパ球に^<51>Cr標識を行ない、Vac-HCV/core-envを感染させ、HCV蛋白を発現する標的細胞の作製を検討している。3エフクター細胞(CTL)の作製:C型慢性肝炎患者の末梢血リンパ球を合成HCVcoreおよびenvペプチドで刺激(誘発)し、^3Hチミヂンの取り込みにより、誘発されたリンパ球を選択し、HCV蛋白を認識しているT細胞のクローニングを実施している。4対象患者のHLAの同定:CTLの標的抗原はMHCと結合(MHC拘束性)して標的細胞に表出される。対象患者のHLAを同定する。5今後の計画:特定のHCV抗原蛋白を認識しているT細胞クローンが得られた患者の末梢血リンパ球にVac-HCV/core-envを感染させて標的細胞として、Cr release cytotoxicity assayによりT細胞クローンからCTLを選別して、そのHLAを同定して、MHC拘束性CTLクローンを樹立する。

Hepatitis C virus (HCV) RNA is isolated from HCV particles, and infection systems other than HCV RNA are identified. HCV core env cDNA assembly, HCV core env protein production, HCV target antigen production, HCV specific MHC binding CTL gene production. 1. The control of Vac-HCV/core-env: HCV cDNA and attenuated virus 2. Study of target cell production: Study of target cell production in peripheral blood of patients with chronic hepatitis C<51>, including detection of Cr markers, Vac-HCV/core-env infection and HCV protein production. 3. Control of CTL: HCV core and env selection from peripheral blood lymphocytes of patients with chronic hepatitis C, selection of HCV core and env selection, HCV protein recognition, and implementation of CTL. 4. HLA identification of patients:CTL target antigen is MHC binding (MHC binding) and expressed in target cells. HLA identification for patients. 5 Future projects: identification of specific HCV antigen proteins in T cells, identification of target cells infected with Vac-HCV/core-env in peripheral blood, identification of CTL in Cr release cytotoxicity assay, identification of HLA antigens, and establishment of MHC binding CTL.