アンチセンスRNAによるHBVの遺伝子発現制御の検討(遺伝子治療の基礎的検討)

通过反义RNA检查HBV基因表达控制（基因治疗的基础检查）

• 批准号: 01570378
• 负责人: 三田村 圭二
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570378/
• 关键词: アンチセンスRNA; 合成オリゴヌクレオチド; トランスフォ-マント; B型肝炎ウイルス; HBs抗原; S-遺伝子; 遺伝子発現

B型肝炎ウイルス(HBV)の遺伝子発現をアンチセンスRNAおよびオリゴヌクレオチドによる制御を目的とし,HBVの外被蛋白・HBs抗原をコ-ドするS-遺伝子を導入したHBs抗原発現トランスフォ-マントを作製し,アンチセンスS遺伝子のトランスフェクションおよびアンチセンス合成オリゴヌクレオチドによるHBs抗原発現抑制を検討した。1.HBs抗原発現トランスフォ-マントの作製HBVDNAのHBs抗原をコ-ドするS遺伝子をレトロウイルスベクタ-,pZiP-NeoSV(X)に組み込み,マウスN1H3T3細胞にトランスフェクトし,neomycinに耐性なトランスフォ-マントを選択し,HBs抗原を産生するトランスフォ-マントを作製した。このトランスフォ-マントはHBV-S遺伝子を組み込み,mRNAの転写体が認められ,細胞内にHBs抗原の産生がRTA法およびウエスタンブロッティング法により確認された。2.アンチセンスS遺伝子によるHBs抗原発現抑制の検討(1)pZiP-NeoSV(X)のneomycin耐性遺伝子をhygromycin耐性遺伝子に置換したベクタ-にS遺伝子に対するアンチセンスS遺伝子を入れ,HBs抗原発現トランスフォ-マントにトランスフェクトし,hygromycin耐性により選択して、アンチセンスS遺伝子が導入されたトランスフォ-マントを作製し、HBs抗原発現抑制を検討中である。(2)HBVDNAのS遺伝子の開始コドンを含む5′端および3′端に向かって各々20塩基,S遺伝子の中間部および終末コドンを含む20塩基の合成アンチセンスオリゴヌクレオチドによるHBs抗原の発現抑制を検討した。S遺伝子の開始コドンを含む5′端側のアンチセンスオリゴヌクレオチドが最も強くHBs抗原の発現を制御した。しかし,その抑制効果はあまり強くなく,30%前後の抑制であった。オリゴヌクレオチドの細胞内への侵入,不安定性などなお検討を必要とする。

Hepatitis B virus (HBV) をアンチセンスRNA virusドによるcontrolをpurposeとし, HBV coat protein・HBs antigenをコ-ドするS-缝子を ImportしHBs antigen is present in the HBs antigen - マントを Manufacturer The ションおよびアンチセンス synthesized オリゴヌクレオチドによるHBs antigen is now suppressed by を検した. 1. HBs Antigen トランスフォ-マントの HBVDNA HBs Antigen をコ-ドするS缝子をレトロウイルスベクタ-,pZiP-NeoSV(X)に集团み込み, マウスN1H3T3 cells にトランスフェクトし, neomycin resistance なトランスフォ-マントを选択し, HBs antigen をproduced するトランスフォ-マントをproduced した.このトランスフォ-マントはHBV-S 缝子を组み込み,mRNAの転书体がcognizeめられ, The production of intracellular HBs antigen is confirmed by the RTA method using the RTA method. 2. アンチセンスS 缝子によるHBs antigen expression inhibition test (1) pZiP-NeoSV (X) neomyc inresistant legacy 伝子をhygromycin resistance legacy 伝子に replacement したベクタ-にS legacy 伝子に対するアンチセンスS legacy 伝子を入れ, HBs antigen発appears トランスフォ-マントにトランスフェクトし, hygromycin resistance により选して, アンチセンスス伝子が imported into されたトランスフォ-マントをproduced し, HBs antigen present suppression を検曰中である. (2) The beginning of HBVDNA's remaining 伝子 contains the 5′ end and the 3′ end of the HBV DNA. Each has 20 bases and the middle part of the HBV DNA remains.アンチセンスオリゴヌクレオチドによるHBs antigen の発appears to inhibit を検した. S 伝子の开户コドンを contain 5′ terminal side のアンチセンスオリゴヌクレオチドがmostもstrongくHBsantigenの発appearsをcontrolした.しかし, その inhibiting effect はあまりstrong くなく, 30% before and after の suppression であった. It is necessary to invade the cells of the オリゴヌクレオチドの, and it is unstable and necessary.