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リーシュマニアの新しいP-糖タンパク質の構造と機能に関する研究

利什曼原虫新型P-糖蛋白的结构与功能研究

基本信息

批准号：
07670293
负责人：
片倉賢
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

P-糖タンパク質は、ATP結合領域をもつ膜輸送タンパク質であり、リーシュマニアの薬剤耐性の分子機構において中心的役割を果たしていることが最近の研究によって明らかになってきている。これまで2つの異なるタイプのP-糖タンパク質遺伝子がリーシュマニアから単離されているが、今回、これらとは異なる新しいタイプのP-糖タンパク質遺伝子と考えられる遺伝子をクローニングし、その全塩基配列を決定した。まず、L. amazonensisのDNAを材料として、P-糖タンパク質遺伝子群に共通なATP結合領域をPCR法で増幅した。次いで、この断片をプローブとしてλGEM-11ゲノムライブラリーをスクリーニングし、得られた陽性ファージをサブクローニングしたのち、プライマーウォーキング法によってオープンリーディングフレーム(ORF)の塩基配列を決定した。ORFは3801塩基対からなり、推定される1267のアミノ酸配列は、2つのATP結合領域をもつ膜貫通型のP-糖タンパク質遺伝子機構を示した。ヒトのP-糖タンパク質遺伝子MDR1(1280残基)とのアミノ酸ホモロジーは39%であり、リーシュマニアの既知のP-糖タンパク質遺伝子であるldmdr1(1341残基)およびltpgpA(1548残基)とのホモロジーは47%および29%であった。また、サザンハイブリダイゼイションによる解析の結果、この遺伝子は単一遺伝子であるものと考えられた。以上の結果から、今回クローニングした遺伝子は、リーシュマニアの新しいタイプのP-糖タンパク質遺伝子である可能性が強く示唆された。現在、本遺伝子を発現ベクターに組み込み、リーシュマニア細胞内で発現させることにより、その機能を明らかにする実験を進めている。

P-glucose タンパク性は, ATP binding field をもつ membrane transport タンパクquality であり, リーシュマニアの薬剤 resistance The most recent research project at the Center for Molecular Mechanical Research is the Molecular Research Center.これまで2つのdifferentなるタイプのP-sugar タンパク性伝子がリーシュマニアから単里されているが、this time、これらとはDifferent new onesる伝子をクローニングし, その全婩组arrayをdeterminationした.まず, L. amazonensis DNA material material, P-glycose DNA subgroup, common ATP binding domain, PCR method, and amplitude enhancement. Sub-いで、この片をプローブとしてλGEM-11ゲノムライブラリーをスクリーニングし, 得られたpositive ファージをサブクローニングしたのち、プライマーウォーキング法によってオープンリーディングフレーム(ORF)の婩组arrayをdeterminationした. ORFは3801塩対からなり, presumedされる1267のアミノacid sequenceは, 2 The ATP-binding field is a membrane-penetrating P-glycosaccharide substructure.ヒトのP-sugar タンパク缝子MDR1 (1280 residues) とのアミノAcid ホモロジーは 39% であり, リーシュマニアのknown のP-sugar タンとのホモロジーは47%および29%であった.また、サザンハイブリダイゼイションによるanalytic knot Fruit, この缝子は単一弝子であるものと卡えられた. The result of the above is から, this chapter is a new oneしいタイプのP-sugar タンパク性伝子である possibility がstrong くshows instigation された. Now, the main legacy of the original を発 appears in the ベクターに组み込み, and the リーシュマニア intracellular発appears させることにより, そのfunction を明らかにする実験を入めている.