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筋小胞体カルシウムポンプの触媒部位を構成するアミノ酸残基の同定と機能解析

构成肌浆网钙泵催化位点的氨基酸残基的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
07680667
负责人：
金沢徹
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseの触媒サイクルにおいて、カルシウム・酵素・ATP複合体形成に伴う酵素のコンフォメーション変化と、それに引き続くリン酸化中間体形成に対する溶媒水の影響を、反応液の水を有機溶媒で部分的に置換することによって調べた。その結果、水の活動度の減少によってカルシウム・酵素・ATP複合体形成に伴う酵素のコンフォメーション変化の速度は全く影響されないが、それに引き続くATPから酵素タンパク質へのリン酸基転移反応が著明に遅くなることが明らかとなった。このことは、Ca^<2+>-ATPaseの触媒サイクルの初期段階において、水分子が酵素の迅速なturnovertに重要な役割を果たしていることを示している(J.Biol.Chem.271,5481-5486,1996)。2.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseをcyclohexanedioneで化学修飾することにより、ATPaseの触媒部位に存在する2個のアルギニン残基を同定した。これらのアルギニン残基は、一次構造上約100残基離れた位置にあった。このことは、ATPaseの触媒部位がATPaseの一次構造上遠く離れた二つのドメインから構成されていることを示している。さらに、各種の基質によるプロテクションを調べた結果、これらのアルギニン残基はATP結合部位のうち、リン酸基が結合する領域に位置していることが明らかとなった(in preparation)。

1. Ca^<2+>-ATPase catalytic system, enzyme and ATP complex formation, accompanied by enzyme reaction system, enzyme and ATP complex formation, the influence of solvent water, reaction solution water and organic solvent partial replacement, the influence of solvent water and organic solvent. As a result, the activity of water decreases, the enzyme changes, and the ATP complex changes. The initial stages of Ca^<2+>-ATPase catalytic activity and the important role of water molecules in enzyme turnover are shown (J. Biol. Chem. 271, 5481 -5486,1996). 2. The cytosome Ca^<2+>-ATPase is chemically modified by cyclohexanedione, and two cyclohexanedione residues are identified in the catalytic site of the ATPase. The residue is located about 100 residues away from the primary structure. The primary structure of ATPase is far away from the secondary structure. In addition, various substrates were selected to modulate the results, such as ATP binding sites, amino acid residues, and binding domains.