筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseの構造と機能-化学修飾と部位特異的変異による研究

肌浆网Ca^2+-ATP酶的结构和功能——化学修饰和位点特异性突变研究

• 批准号: 08680671
• 负责人: 金沢 徹
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680671/
• 关键词: 筋小胞体; カルシウムポンプ; カルシウムATPアーゼ; 構造解析; 機能解析; 化学修飾; 部位特異的変異; 分子機構

1.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseをアルギニン残基指向性試薬cyclohexanedione(CHD)を用いて修飾した。この修飾によるCa^<2+>-ATPaseの各部分反応の阻害と、それに対する各種基質(ATP、ADP、AMP)の保護効果を調べることにより、次のことを明らかにした。(1)Ca^<2+>-ATPaseのArg-489とArg-678は、触媒部位のATP結合部位のうち、ATPのαーリン酸基が占める領域またはそのごく近傍に位置している。(2)CHD修飾による酵素阻害に関与するアルギニン残基は、Arg-489またはArg-678(またはその両者)である(J.Biol.Chem.271,28933-28941,1996)。2.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseをヒスチジン残基指向性試薬diethyl pyrocarbonate(DEPC)を用いて修飾した。この修飾によるCa^<2+>-ATPaseの各部分反応の阻害と、それに対する各種基質の保護効果を調べることにより、Ca^<2+>-ATPaseのHis-5がリン酸化中間体の加水分解に関与していることを明らかにした(in preparation)。3.上記の各種アミノ酸残基について、部位特異的変異による機能解析が現在進行中である。4.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseにおいて、リン酸化とFITC(fluorescein 5-isothiocyanate)結合のstoichiometryが0.5:1.0であることを明らかにした(J.Biol.Chem.272,6232-6251,1997)。

1. The small cell bodies of tendons Ca ^ & lt;2+>-ATPase were modified by cyclohexanedione (CHD) with the directivity of residues. Make sure that all parts of the lt;2+>-ATPase system are responsible for the protection of all kinds of basic materials (ATP, ADP, AMP). The main results are as follows: (1) Ca ^ & lt;2+>- ATPase Arg-489 Arg-678, the catalyst site, the ATP binding site, and the acid group of ATP, the acid group occupies the most important position in the field. (2) CHD modified the enzyme to block the residue and Arg-489 the Arg-678 (J.Biol.Chem.271) 28933-28941). two。 The small cell bodies of tendons Ca ^ & lt;2+>-ATPase were modified by diethyl pyrocarbonate (DEPC) with the directivity of residues. All parts of the CAC ^ & lt;2+>-ATPase system are responsible for the protection of environmental pollution, lt;2+>- ATPase, his-5 and in preparation in acidizing process. 3. In the past, all kinds of acid residues have been analyzed and the results have been analyzed by the machine that is now in progress. 4. The small cell bodies of tendons Ca ^ & lt;2+>-ATPase acidified FITC (fluorescein 5-isothiocyanate) were combined with stoichiometry 0.5 and 1.0 respectively.

项目成果

Keisuke Kimura,Hiroshi Suzuki,Takashi Daiho,Kazuo Yamasaki,Tohru Kanazawa: "Idendtification of Arginyl Residues Located at the ATP Binding Site of Sarcoplasmic Reticulum Ca^<2+>-ATPase : MODIFICATION WITH 1,2-CYCLOHEXANEDIONE." The Journal of Biological C

Keisuke Kimura、Hiroshi Suzuki、Takashi Daiho、Kazuo Yamasaki、Tohru Kanazawa：“位于肌浆网 Ca^<2 >-ATP 酶 ATP 结合位点的精氨酰残基的鉴定：用 1,2-环己烷二酮进行修饰。”

Satoshi Nakamura,Hiroshi Suzuki,Tohru Kanazawa: "Stoichiometry of Phosphorylation to Fluorescein 5-Isothiocyanate Binding in the Ca^<2+>-ATPase of Sarcoplasmic Reticulum Vesicles." The Journal of Biological Chemistry. 272・10. 6232-6251 (1997)

Satoshi Nakamura、Hiroshi Suzuki、Tohru Kanazawa：“肌浆网囊泡 Ca^<2+>-ATP 酶中荧光素 5-异硫氰酸酯磷酸化的化学计量”，《生物化学杂志》272・10。 ）