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筋小胞体カルシウムポンプの触媒部位の構造と機能

肌浆网钙泵催化位点的结构和功能

基本信息

批准号：
06680600
负责人：
金沢徹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseのジスルフィド結合がCa^<2+>とプリンヌクレオチド(またはその非加水分解性アナログ)存在下でのみジチオスレイトール(DTT)で還元されること、およびこの還元によってCa^<2+>-ATPaseの特定反応ステップ(リン酸化中間体の異性化)が選択的に阻害されることを明らかにした。この結果は、Ca^<2+>で活性化されたCa^<2+>-ATPaseとプリンヌクレオチドの複合体形成に際して起こる構造変化でジスルフィド結合が、添加したDTTに対して露出されることを示している(J.Biol.Chem.269,11060-11064,1994)。2.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseにおけるATPによるトリプトファンの蛍光変化は、ATPaseの反応サイクルにおけるADP感受性リン酸化酵素形成に伴う構造変化を反映することを、ストップトフロー蛍光分光測定とラピッドクウエンチング法を用いて明らかにした(J.Biol.Chem.269,16015-16019,1994)。3.蛍光性試薬でCys-674を特異的に標識した筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseを用いて、ストップトフロー蛍光分光測定とラピッドクエンチング法により、反応初期相における構造変化に対する二価カチオンの影響を調べた。Ca^<2+>・酵素・基質複合体形成時の構造変化は、二価カチオンの影響を受けなかったが、ADP感受性リン酸化酵素形成時の構造変化は二価カチオンによって著明に影響されることを明らかにした(Biochemistry 33,8240-8246,1994)。4.筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseのリン酸化中間体の異性化に際して、トリプトファンの蛍光変化を伴う構造変化が起こることを、K^+非存在下、ラサロシド存在下で示した((J.Biol.Chem.270,Feb.,1995 in press)。

1. In the presence of Ca^<2+>-ATPase, Ca^<2+>-ATPase is bound to a specific enzyme (Ca^<2+>-ATPase). The results showed that Ca^<2+>-ATPase was activated during the formation of Ca^<2 +>-ATPase complex, and the structure of Ca^<2 +>-ATPase complex was changed during the formation of Ca ^<2+>-ATPase complex (J. Biol. Chem. 269, 11060 -11064,1994). 2. The fluorescence changes of ATP in the Ca^<2+>-ATPase of muscle vesicles reflect the accompanying structural changes in the formation of ADP-sensitive fluorescence acidification enzymes in the reverse transcription of ATPase. This is the result of the use of Statopro fluorescence spectroscopy and the rapid detection method (J. Biol. Chem. 269, 16015 -16019,1994). 3. Cys-674 was used as a specific marker for Ca^<2+>-ATPase, and the effect of structural changes on Ca^<2+>-ATPase was modulated by UV spectrophotometry. Structural changes during the formation of Ca^<2+>·enzyme-matrix complexes are affected by the presence of Ca ^<2 +>·4. The structural transformation of Ca^<2+>-ATPase in muscle cells was observed in the absence of K^+ and in the presence of K^+(J. Biol. Chem. 270,Feb., 1995 in press)。