グルココルチコイド産生細胞の最終分化に関連するAP-1様転写調節蛋白質の同定

与糖皮质激素产生细胞终末分化相关的 AP-1 样转录调节蛋白的鉴定

• 批准号: 07680697
• 负责人: 向井 邦晃
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680697/
• 关键词: 副腎皮質; ステロイドホルモン; シトクロムP-450; グルココルチコイド; コルチコステロン; 転写因子

前年度までに、マウス副腎皮質由来のY1細胞をもちいた実験から,CYP11B1遺伝子の転写開始点の上流にAP-1様DNA結合蛋白質が結合すること、この配列がプロモーター活性に不可欠であることが明らかになった。また、AP-1配列の3'側にAd4結合蛋白質(Ad4BP)の結合配列が存在したが、蛋白質の結合は認められず、Ad4配列には転写活性化能は認められなかった。さらに、AP-1が、副腎皮質の全層に存在する転写因子であるAd4BPの結合を抑制して転写を活性化することが判明した。今年度は、Y1細胞の核抽出液に見いだされたAP-1様転写調節蛋白質の構成因子の同定と、ラット副腎皮質におけるAP-1様転写調節蛋白質の存在を解析を行った。1.AP-1の構成蛋白質junおよびfosファミリーのメンバーを認識する抗体を用いたゲルシフト法により、Y1細胞の核抽出液に見いだされたAP-1蛋白質は、junD蛋白質とFos関連蛋白質から構成されることが判明した。2.CYP11B1遺伝子が発現しているラット副腎皮質束状層細胞から核抽出液を調製し、AP-1配列とAd4配列を含む転写調節領域へのDNA結合蛋白質を調べた。その結果、Y1細胞の核抽出液で得られた結果とほとんど同一の結果が得られた。すなわち、束状層細胞の核抽出液には、AP-1とAd4BPの結合活性があり、AP-1の活性がAd4BPの活性に比べて数倍高かった。AP-1とAd4BPは同時には結合せず、副腎皮質束状層細胞においても、AP-1がAd4BPの結合を抑制することが判明した。以上の結果は、AP-1が、CYP11B1遺伝子の副腎皮質内における細胞層特異的発現に重要な役割を持つことを示す。

In previous years, AP-1 DNA binding proteins were present upstream of the CYP11B1 gene expression initiation point in Y1 cells from which the adrenal cortex originated. Ad4 binding protein (Ad4 BP) binding to the 3'side of AP-1 alignment exists, protein binding is recognized, and Ad4 alignment is activated. It was found that AP-1 and Ad4BP were present in all layers of the adrenal cortex, and that the binding of Ad4BP was inhibited and the activity of Ad4BP was inhibited. In this year, nuclear extracts from Y1 cells were analyzed for the presence of AP-1 regulatory proteins in pararenal cortex. 1. AP-1 protein and Fos protein components were identified by the method of protein analysis and nuclear extracts from Y1 cells. 2. CYP11B1 gene was expressed in renal cortical fasciculate cells and regulated in nuclear extract, AP-1 alignment and Ad4 alignment, including DNA binding proteins in regulatory domains. Y1 cell nuclear extract was obtained from the same sample. The binding activity of AP-1 and Ad4BP in nuclear extract of fascicular layer cells was several times higher than that of AP-1. AP-1 and Ad-4BP bind simultaneously in the cortex fascicularis of the kidney, and AP-1 binds to Ad-4BP simultaneously in the cortex fascicularis of the kidney. These results indicate that AP-1 and CYP11B1 genes are important for cell layer-specific development in the adrenal cortex.

项目成果

Kuniaki Mukai: "Ivolvement of an AP-1 complex in zone-specific expression of the CYP11B1 gene in the rat adrenal cortex" Molecular and Cellular Biology. 15. 6002-6012 (1995)

Kuniaki Mukai：“AP-1 复合物在大鼠肾上腺皮质 CYP11B1 基因区域特异性表达中的参与”分子和细胞生物学。

向井 邦晃: "副腎皮質における細胞層得意的なグルココルチコイド合成酵素遺伝子(CYP11B1)の転写調節機構" 第18回日本分子生物学会年会(1995年12月)年会要旨集. 285-285 (1995)

Kuniaki Mukai：“肾上腺皮质中细胞层特异性糖皮质激素合酶基因（CYP11B1）的转录调节机制”日本分子生物学会第18届年会论文集（1995年12月285-285）。

向井 邦晃: "副腎皮質細胞の分化とステロイド合成系遺伝子の発現調節" バイオサイエンスとインダストリー. 53. 43-44 (1995)

Kuniaki Mukai：“肾上腺皮质细胞的分化和类固醇生成基因表达的调节”《生物科学与工业》53. 43-44 (1995)。

向井 邦晃: "副腎皮質におけるグルココルチコイド合成酵素遺伝子の細胞層選択的な発現への転写因子AP-1の関与" 生化学. 67. 772-772 (1995)

Kuniaki Mukai：“转录因子 AP-1 参与肾上腺皮质中糖皮质激素合酶基因的细胞层选择性表达”生物化学 67. 772-772 (1995)。