副腎皮質の各細胞層の機能分化に関する研究-ミネラロコルチコイド合成酵素あるいはグルココルチコイド合成酵素遺伝子の層特異的な転写因子の同定-

肾上腺皮质各细胞层功能分化的研究 - 盐皮质激素合酶或糖皮质激素合酶基因的层特异性转录因子的鉴定 -

• 批准号: 05780466
• 负责人: 向井 邦晃
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780466/
• 关键词: 副腎皮質; ステロイドホルモン; シトクロムP‐450; ミネラロコルチコイド; グルココルチコイド; 転写因子; 遺伝子発現調節

1.<ラットのグルココルチコイド合成酵素遺伝子CYP11B1のプロモーター内の調節エレメントの存在>プロモーター内の塩基配列に種々の欠失をつくり、CAT遺伝子につないで、これらの融合遺伝子を持つプラスミドを構築した。マウス副腎皮質由来のY1細胞にこれらのプラスミドを導入し、CATアッセイをおこなった。この遺伝子の転写開始点から‐314と‐252の間にプロモーター活性の正の制御配列が存在した。2.<転写開始点から‐310から‐294の位置に蛋白質の結合部位の同定>転写開始点から‐314と‐252の間の塩基配列を含むプローブとY1細胞から調整した核抽出液をインキュベートすると、ゲルシフト法によりDNAと蛋白質の複合体が生じることがわかった。DNaseIをもちいたフットプリント法により、‐310から‐294までの塩基配列が蛋白質の結合によって覆われることがわかった。この塩基配列の中央に、転写調節蛋白質としてよく知られているAP‐1蛋白質の結合配列に似たもの(AP‐1様配列)が存在した。AP‐1様配列に結合する蛋白質は、この配列に対して、AP‐1蛋白質のコンセンサス認識配列に対してよりも強く結合した。このことから、AP‐1様配列に結合する蛋白質は、既知のAP‐1蛋白質とは異なる可能性が示唆された。3.<AP‐1様配列がプロモーター内の重要な正の調節エレメントであること>AP‐1様配列の塩基配列を置換し、プロモーター活性をCATアッセイで調べたところ、活性は10分の1に減少した。以上からAP‐1様配列はプロモーター活性において、必須な配列であることが判明した。4.<ミネラロコルチコイド合成酵素遺伝子CYP11B2にはCYP11B1見いだされたAP‐1様配列が存在しないこと>ゲルシフト法で、CYP11B1のAP‐1様配列への結合蛋白質がCYP11B2のプロモーター領域に結合しないことが判明した。CYP11B1とCYP11B2は副腎皮質内の異なる細胞層に発現するからAP‐1様配列が細胞層特異的な発現調節に関与している可能性が示唆された。

1. < ラ ッ ト の グ ル コ コ ル チ コ イ ド synthetic enzyme heritage 伝 son CYP11B1 の プ ロ モ ー タ ー の adjustment within エ レ メ ン ト の is > プ ロ モ ー タ ー の in salt base with column に kind 々 の owe lost を つ く り, CAT survived 伝 に つ な い で, こ れ ら の fusion heritage 伝 son を hold つ プ ラ ス ミ ド を build し た. Youdaoplaceholder0 ウス the paraprenal cortex is derived from <s:1> Y1 cells に れら れら プラス プラス プラス ドを and ドを, which are then introduced into アッセ, CATアッセ アッセ をお and なった なった なった. The <s:1> cultural heritage 伝 sub-<s:1> 転 writes the starting point ら ら -314 と -252 にプロモ にプロモ タ タ タ active <s:1> the main sequence of the main sequence が there is an た. 2. < planning write starting point か ら ‐ 310 か ら ‐ 294 の position の に protein binding site の with fixed > planning write start か ら ‐ と 314 ‐ 252 の の salt base with column を containing む プ ロ ー ブ と Y1 cells か ら adjustment し た nuclear extract を イ ン キ ュ ベ ー ト す る と, ゲ ル シ フ ト method に よ の り と DNA protein complex が raw じ る こ と が Youdaoplaceholder0 った. DNaseI を も ち い た フ ッ ト プ リ ン ト method に よ り, ‐ 310 か ら ‐ 294 ま で の salt base with column が protein の combining に よ っ て fu わ れ る こ と が わ か っ た. こ の salt base with column の central に, planning to write regulating protein と し て よ く know ら れ て い る AP ‐ 1 protein の combined with column に like た も の (AP ‐ others with column 1) が し た. AP ‐ 1 others go に combining す る protein は, こ の match column に し seaborne て, AP ‐ 1 protein の コ ン セ ン サ ス meet with column に し seaborne て よ り も strong く combining し た. <s:1> <s:1> と ら ら, ap-1 in the same arrangement に binds to する protein, it is known that the <s:1> ap-1 protein と <s:1> is different なる possibility が indicates された. 3. < AP ‐ 1 others go が プ ロ モ ー タ ー important な の is の adjustment within エ レ メ ン ト で あ る こ と > AP ‐ 1 others go の salt base with column を replacement し, プ ロ モ ー タ ー active を CAT ア ッ セ イ で adjustable べ た と こ ろ, 1 に reduce active は 10 の し た. Above か ら AP ‐ 1 others go は プ ロ モ ー タ ー active に お い て, must な match column で あ る こ と が.at し た. 4. < ミ ネ ラ ロ コ ル チ コ イ ド synthetic enzyme heritage 伝 son CYP11B2 に は CYP11B1 see い だ さ れ た AP ‐ 1 others with column が exist し な い こ と > ゲ ル シ フ ト で, CYP11B1 の AP ‐ 1 others go へ の binding protein が CYP11B2 の プ ロ モ ー タ ー fields に し な い こ と が.at し た. CYP11B1 と CYP11B2 は の variations within the adrenal cortex な る cell layer に 発 now す る か ら AP ‐ 1 others が cell layer with column specific な 発 now adjust に masato and し て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

向井 邦晃: "副腎皮質の束網状層細胞に特異的に発現するラットCYP11B1(グルココルチコイド合成P‐45011beta)遺伝子の調節領域の解析" 生化学. 65. 929-929 (1993)

Kuniaki Mukai：“在肾上腺皮质网状层细胞中特异性表达的大鼠CYP11B1（糖皮质激素合成P-45011β）基因的调节区域的分析”生物化学65。929-929（1993）。