ミネラルコルチコイドおよびグルココルチコイド産生細胞の最終分化機構

盐皮质激素和糖皮质激素产生细胞的终末分化机制

• 批准号: 08680701
• 负责人: 向井 邦晃
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680701/
• 关键词: 副腎皮質; ステロイドホルモン; ミネラルコルチコイド; グリコルチコイド; 細胞分化

高等動物の副腎皮質は、未分化な副腎原基細胞から発生・分化し、外側から球状層、束状層、網状層と呼ばれる3種類の細胞層から構成される組織となる。この3層の機能的に異なり、球状層がミネラルコルチコイドを、束・網状層がグルココルチコイドを特異的に分泌する。本研究の目的は、細胞工学的、および、発生工学的方法を用いて、副腎皮質を構成する細胞の、層構築を含めた最終分化に関与する因子とその機能を明らかにすることである。細胞層特異的に外来遺伝子を発現させるには、特異的なプロモーター(ターゲティングプロモーター)が必要である。まず、グルココルチコイド産生細胞層選択的に外来遺伝子を発現させるためのターゲティングプロモーターの同定を行った。グルココルチコイド産生細胞である束・網状層細胞に最も特徴的に発現する遺伝子は、CYP11B1である。本研究の代表者らはすでにこの遺伝子の調節領域を含むクローンを得ている。これと、束・網状層細胞と性質の似たY-1細胞に加え、種々の組織由来の株細胞を用いてトランスフェクトし、ターゲティングプロモーターの同定を行った。その結果、CYP11B1の上流1.2kbのDNAが、副腎皮質の束・網状層に特異的なプロモーターとして機能することが強く示唆された。ミネラルコルチコイド産生細胞のためのターゲティングプロモーターを同定するにあたっては、球状層の細胞の性質を保持した細胞株はこれまで知られていない。そのため、ラット副腎から球状層細胞の調製を行った。副腎皮質の皮膜に接した部分から細胞を分散させ、ショ糖密度勾配遠心法により、細胞を分画した。これらからRNAを抽出し、逆転写酵素反応後PCR法を用いて、CYP11B2を発現している細胞を同定し、単離することに成功した。この細胞を用いて、球状層に特徴的な遺伝子であるCYP11B2遺伝子上流からターゲティングプロモーター領域の同定をすることが可能になり、その実験を継続している。

高等动物的肾上腺皮质与未分化的肾上腺种族灭绝细胞发展并区分开，是由三种类型的细胞层组成的组织，称为球形层，束层和网状层。三层层的功能不同，球形层专门分泌矿物皮质激素，而束线性层则专门分泌糖皮质激素。这项研究的目的是使用细胞工程和发育工程方法来阐明终端分化涉及的因素，包括构成肾上腺皮质的细胞的层构造及其功能。需要特定的启动子（靶向启动子）在细胞层中特别表达外源基因。首先，确定靶向启动子可以选择性地表达产生糖皮质激素细胞层的外源基因。 CYP11B1中最独特的基因，是糖皮质激素产生细胞的束扣细胞，是糖皮质激素产生的细胞。这项研究的代表已经获得了包含该基因调节区域的克隆。除了Y-1细胞与捆绑扣细胞具有相似特性的Y-1细胞外，还可以转染来自各种组织的细胞，并鉴定出靶向启动子。结果强烈表明，CYP11B1上游的1.2 kb的DNA充当肾上腺皮质的束和网状层的启动子。在识别矿物皮质生产细胞的靶向启动子时，尚无众所周知的细胞系来保留球状层的细胞特性。因此，从大鼠肾上腺制备球状层细胞。与肾上腺皮质膜接触的部分分散细胞，并通过蔗糖密度梯度离心分离细胞。从这些中提取RNA，并使用逆转录酶反应，然后用PCR鉴定出表达CYP11B2的细胞。使用这些细胞，可以鉴定CYP11B2基因上游的靶向启动子区域，Globular层的基因特征，实验仍在继续。

项目成果

向井邦晃: "副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)に対するグルココルチコイド合成酵素遺伝子(CYP11B1)の応答と転写因子AP-1の役割" 生化学. 68・7. 655-655 (1996)

Kuniaki Mukai：“糖皮质激素合酶基因（CYP11B1）对促肾上腺皮质激素（ACTH）的反应和转录因子AP-1的作用”生物化学68・7（1996）。

Kuniaki Mukai: "Zone-specific expression of the rat CYP11B1 gene in the adrenal cortex" 2nd International Synposium on Molecular Steroidogenesis. 18-18 (1996)

Kuniaki Mukai：“肾上腺皮质中大鼠 CYP11B1 基因的区域特异性表达”第二届国际分子类固醇生成研讨会。

Kuniaki Mukai: "Zone-specific transcriptional activation of the CYP11B1 gene by an AP-1 transcription factor in the rat adrenal cortex" The Fourth Asian Conference on Transcription. 74-74 (1996)

Kuniaki Mukai：“大鼠肾上腺皮质中 AP-1 转录因子对 CYP11B1 基因的区域特异性转录激活”第四届亚洲转录会议。

Kuniaki Mukai: "Cell-specific and hormonally regulated gene expression directed by the CYP11B1 gene promoter in the rat adrenal cortex" The Keio Journal of Medicine. 45・Suppl. S61-S61 (1996)

Kuniaki Mukai：“大鼠肾上腺皮质中 CYP11B1 基因启动子指导的细胞特异性和激素调节基因表达”Keio Journal of Medicine 45·S61-S61 (1996)。