ミネラルコルチコイドおよびグルココルチコイド産生細胞の最終分化機構

盐皮质激素和糖皮质激素产生细胞的终末分化机制

• 批准号: 08680701
• 负责人: 向井 邦晃
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680701/
• 关键词: 副腎皮質; ステロイドホルモン; ミネラルコルチコイド; グリコルチコイド; 細胞分化

高等動物の副腎皮質は、未分化な副腎原基細胞から発生・分化し、外側から球状層、束状層、網状層と呼ばれる3種類の細胞層から構成される組織となる。この3層の機能的に異なり、球状層がミネラルコルチコイドを、束・網状層がグルココルチコイドを特異的に分泌する。本研究の目的は、細胞工学的、および、発生工学的方法を用いて、副腎皮質を構成する細胞の、層構築を含めた最終分化に関与する因子とその機能を明らかにすることである。細胞層特異的に外来遺伝子を発現させるには、特異的なプロモーター(ターゲティングプロモーター)が必要である。まず、グルココルチコイド産生細胞層選択的に外来遺伝子を発現させるためのターゲティングプロモーターの同定を行った。グルココルチコイド産生細胞である束・網状層細胞に最も特徴的に発現する遺伝子は、CYP11B1である。本研究の代表者らはすでにこの遺伝子の調節領域を含むクローンを得ている。これと、束・網状層細胞と性質の似たY-1細胞に加え、種々の組織由来の株細胞を用いてトランスフェクトし、ターゲティングプロモーターの同定を行った。その結果、CYP11B1の上流1.2kbのDNAが、副腎皮質の束・網状層に特異的なプロモーターとして機能することが強く示唆された。ミネラルコルチコイド産生細胞のためのターゲティングプロモーターを同定するにあたっては、球状層の細胞の性質を保持した細胞株はこれまで知られていない。そのため、ラット副腎から球状層細胞の調製を行った。副腎皮質の皮膜に接した部分から細胞を分散させ、ショ糖密度勾配遠心法により、細胞を分画した。これらからRNAを抽出し、逆転写酵素反応後PCR法を用いて、CYP11B2を発現している細胞を同定し、単離することに成功した。この細胞を用いて、球状層に特徴的な遺伝子であるCYP11B2遺伝子上流からターゲティングプロモーター領域の同定をすることが可能になり、その実験を継続している。

In higher animals, there are three kinds of cell layers in the adrenal cortex, undifferentiated adrenal primordium cells, lateral glomerular layer, fasciculate layer and reticular layer, which constitute the tissues. The three layers have different functions, the spherical layer has different functions, and the bundle and network layer have different functions. The purpose of this study is to clarify the function of cellular, cellular and cellular architecture, including factors related to final differentiation, in the adrenal cortex using cytoengineering, bioengineering methods. Cell layer-specific foreign genes are necessary for the development of cell layer-specific foreign genes Recently, the same process has been carried out for six months to detect foreign genes produced by cell layer selection in the cells of the cells. The most characteristic expression of CYP11B1 in reticular cells is that of CYP11B1. The authors of this study are interested in finding out the regulatory domain of these genes. The characteristics of the reticular layer cells are similar to those of Y-1 cells, and the characteristics of the reticular layer cells are similar to those of Y-1 cells. The results showed that CYP11B1 up-stream 1.2 kb DNA was highly functional in the bundle and reticular layers of the pararenal cortex. The cell lines that produce the cells have the same properties as the cells that produce the cells. The modulation of globular cells in the kidney is carried out. The cortex of the kidney is divided into two parts: the cells are divided into two parts, and the glucose density is matched with the distance between the cells. The PCR method was successfully used to detect CYP11B2 in cells after RNA extraction and reverse transcription. These cells are characterized by the presence of CYP11B2 gene in the globular layer, and the presence of CYP11B2 gene in the upper layer of the cell is possible.

项目成果

向井邦晃: "副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)に対するグルココルチコイド合成酵素遺伝子(CYP11B1)の応答と転写因子AP-1の役割" 生化学. 68・7. 655-655 (1996)

Kuniaki Mukai：“糖皮质激素合酶基因（CYP11B1）对促肾上腺皮质激素（ACTH）的反应和转录因子AP-1的作用”生物化学68・7（1996）。

Kuniaki Mukai: "Zone-specific expression of the rat CYP11B1 gene in the adrenal cortex" 2nd International Synposium on Molecular Steroidogenesis. 18-18 (1996)

Kuniaki Mukai：“肾上腺皮质中大鼠 CYP11B1 基因的区域特异性表达”第二届国际分子类固醇生成研讨会。

Kuniaki Mukai: "Zone-specific transcriptional activation of the CYP11B1 gene by an AP-1 transcription factor in the rat adrenal cortex" The Fourth Asian Conference on Transcription. 74-74 (1996)

Kuniaki Mukai：“大鼠肾上腺皮质中 AP-1 转录因子对 CYP11B1 基因的区域特异性转录激活”第四届亚洲转录会议。

Kuniaki Mukai: "Cell-specific and hormonally regulated gene expression directed by the CYP11B1 gene promoter in the rat adrenal cortex" The Keio Journal of Medicine. 45・Suppl. S61-S61 (1996)

Kuniaki Mukai：“大鼠肾上腺皮质中 CYP11B1 基因启动子指导的细胞特异性和激素调节基因表达”Keio Journal of Medicine 45·S61-S61 (1996)。