ネフロン各部における発現遺伝子のインデックス化によるセグメント特異的遺伝子の同定

通过索引肾单位每个部分的表达基因来鉴定片段特异性基因

• 批准号: 07807106
• 负责人: 今井 圓裕
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07807106/
• 关键词: 腎ネフロン・セグメント; 遺伝子情報データベース; クローニング; ノーザンブロット; in situ Hybridization

大阪大学細胞生体工学センターの大久保らが、各組織・細胞のmRNAから岡山/Bergの方法により直接プラスミドベクターにクローニング後、自動DNAシークエンス装置を用い約1000クローンのDNA配列をpoly A tailより上流約250bpまで同定し、遺伝子データベース内の既知の配列と比較することにより未知の遺伝子を含む遺伝子発現をインデックス化し同定する方法を開発した。本方法を用い現在までにmicro dissection法によりマウス腎臓から近位尿細管、inner medullary collecting duct (IMCD)を集め解析を終えている。解析した1000クローン中、近位尿細管において646種類また、IMCDにおいては960種類のmRNA発現を同定し、その相対的な発現量を決定した。Gene Bank等の遺伝子情報データベースを用いた検討の結果、近位尿細管では204種類が、IMCDでは194種類が既知のDNA配列と考えられた。他は現在までのところ未知の遺伝子である。また近位尿細管で特異的に発現しかつ、最も発現量が多いクローンは近位尿細管全mRNAの約2%を占めている事が明らかとなった。大久保らにより構築された他臓器あるいは細胞の同様のデータベースと比較することによりコンピュータ上でサブトラクションを行い、先ず近位尿細管に特異的に発現していると考えられる遺伝子群を同定した。複数種類について、Northern Blot法により腎臓特異的な発現を、in situ Hybridization法により腎皮質〜髄質外層における局在を確認した。ついで、マウス腎皮質mRNAより作成したcDNAライブラリーを用いてクローニングを行い、腎臓に主に発現する新しい遺伝子を同定した。

In Osaka University, the cellular biology, engineering and engineering program of Osaka University, the OKUPO, the mRNA of each organization, the method of Berg, the method of direct monitoring, the application of automatic DNA equipment, the configuration of DNA, the upstream of poly A tail, the same as the standard standard, In the system, you know that the configuration is different. The unknown data contains the information. The method is the same as that of the system. This method uses the current micro dissection method to analyze the proximal urine tube and the inner medullary collecting duct (IMCD) set. This paper analyzes the determination of the same and similar parameters in the mRNA of the proximal urethral tube, the proximal urethral tube, and the IMCD urine tube. Gene Bank and other information to compare the results of the test results, proximal urine tube test 204types, IMCD class 194 known DNA configuration test results. He doesn't know what's going on right now. The total mRNA of proximal urine tube accounts for about 2% of the total amount of urine tube. Okubo said the same thing in the same way as the other device, so that you can see if the sub-group is the same as that of the proximal urine tube. The duplicate data, the Northern Blot system, and the in situ Hybridization method are not available. The system is being confirmed. This is the first time that the cDNA has been made by using the mRNA data to make the same decision.