in vivo遺伝子導入法を用いた血管作動性物質の糸球体障害への影響の検討

使用体内基因转移方法检查血管活性物质对肾小球疾病的影响

基本信息

批准号：
06671139
负责人：
今井圓裕
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

近年「糸球体局所でのアンジオテンシンIIの作用が、糸球体硬化病変の成立・進展に関与する」という仮説が提唱されている。この仮説をin vivoで検証するため、ラット腎臓の糸球体細胞にヒト・レニン・ヒト・アンジオテンシノーゲンの遺伝子を導入し、これらを糸球体局所で過剰発現させることによって、メサンギウム細胞の形質転換ならびに糸球体硬化病変が惹起されるかどうかを検討した。遺伝子導入法としては、HVJ-リポソーム法を採用し、10匹の8週令雄性SDラットの左腎動脈から、上記遺伝子を左腎臓に導入した。遺伝子導入3日後にラット3匹を屠殺し、腎臓におけるヒト・レニンの発現を免疫組織化学で確認した。その結果、左腎の約30%の糸球体にヒト・レニンの発現が認められた。残る7匹のラットは、遺伝子導入7日後に屠殺し、その糸球体病変の有無について検討した。その結果、左腎の一部の糸球体で光顕的に細胞外基質の増加を認めた。また、免疫組織化学により、左腎の一部の糸球体で、I型、III型コラーゲン、α-smooth muscle actinの発現が認められた。これらの発現は正常糸球体では認められず、メサンギウム細胞の形質転換のマーカーとされている。これらの糸球体組織変化は、chloramphenicol acetyltransferase(CAT)遺伝子を導入した対照腎では全く認められなかった。また、ヒト・レニン、ヒト・アンジオテンシノーゲン遺伝子の導入3日後、7日後に全身血圧の上昇は認められず、同日のラット血漿ヒト・レニン濃度は測定感度以下であった。以上の結果から、腎臓糸球体局所のレニン-アンジオテンシン系の亢進が、in vivoでメサンギウム細胞の形質転換ならびに糸球体硬化病変を誘導することが示唆された。

最近，该假设已提出：“血管紧张素II在肾小球局部的作用参与肾小球硬化病变的形成和发展。”为了在体内检验这一假设，我们研究了将人类肾素 - 人类血管紧张素原基因转染到大鼠肾脏的肾小球细胞中，并在肾小球中局部过表达它们，从而导致膜细胞转化和肾小球硬化性硬化性巩膜病变。作为一种基因转移方法，采用了HVJ-脂质体方法，并将上述基因从10 8周大的雄性SD大鼠的左肾动脉中引入左肾脏。基因转移三天后，将三只大鼠处死，并通过免疫组织化学证实人肾素在肾脏中的表达。结果，在左肾中约30％的肾小球中观察到人肾素的表达。基因转移后7天处死其余的七只大鼠，并检查了肾小球病变的存在或不存在。结果，在左肾脏的一些肾小球中观察到细胞外基质的增加。免疫组织化学还显示了I型，III型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达，左肾脏的某些肾小球表达。这些表达在正常的肾小球中未观察到，被认为是肾小球转化的标志物。这些肾小球组织的变化未观察到与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）基因转移的对照肾脏中。此外，引入人类肾素和人血管紧张素基因后3或7天未观察到全身性血压，并且大鼠血浆人肾素浓度低于同一天的测量敏感性。这些结果表明，增加的肾素 - 血管紧张素系统局部诱导体内肾小球细胞和肾小球硬化病变。