移植腎の長期生着を目指した遺伝子治療の開発

开发旨在移植肾长期存活的基因疗法

• 批准号: 14657253
• 负责人: 今井 圓裕
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657253/
• 关键词: 遺伝子治療; エレクトロポレーション; 肝細胞増殖因子; ブタ; 腎移植

1.ブタへのHGF遺伝子導入法の確立;ミニブタを、麻酔下で開腹後、腎を摘出し、生理的食塩水で腎臓を還流後、HGF遺伝子を組み込んだ発現ベクター(6mg)を腎静脈をクリップにて結紮し注入した。遺伝子を導入したブタ腎臓を生理的食塩水で満たしたバスタブ型電極に浸し、スクエアー型電圧(30V,100msec)を900msecの休止をおいて、6回行い、エレクトロポレーションにより遺伝子導入を行った。HGF遺伝子導入を行ったブタ腎臓を移植し、遺伝子導入7日後に腎臓を摘出し、腎皮質のHGF活性をELIZA法にて測定した。また、同時に腎組織を抗HGF抗体を用いて、染色した。正常ブタ腎臓では、腎皮質におけるHGFの活性を認めなかったが、遺伝子導入ブタ腎において皮質のHGF活性を認めた。また、腎糸球体での染色を認め、腎糸球体でのHGF遺伝子発現が確認された。2.移植ブタ腎でのHGF遺伝子導入の効果と安全性の評価;HGF遺伝子導入を行ったブタ腎臓を移植した後、対側腎を摘出し、移植モデルブタを作製した。HGF遺伝子およびコントロール遺伝子を導入したブタを1、3、6ヶ月後に安楽死させ、検討した。HGF遺伝子は遺伝子導入を行った腎臓のみに検出され、しかも6ヶ月後まで腎臓に検出された。他の肝臓、肺、脾臓には導入遺伝子は検出されなかった。また、HGF遺伝子を導入した移植モデルブタでは間質線維化が抑制されていた。また、HGF遺伝子を導入した移植モデルブタでは、形質転換のマーカーであるα-smooth muscle actinの発現が抑制されていた。以上、HGF遺伝子によつ安全性及び移植腎保護作用が示唆された。

1. Establishment of HGF gene introduction method for kidney transplantation; renal vein ligation and injection of 6 mg HGF gene after kidney transplantation. For the introduction of the ion, the physiological water is immersed in the electrode, and the voltage (30 V, 100 msec) is suspended for 900 msec., 6 cycles, and the ion is introduced. The HGF gene was introduced into the kidney and transplanted. The kidney was extracted 7 days after the gene introduction, and the HGF activity in the kidney cortex was measured by ELIZA method. At the same time, the kidney tissue was stained with anti-HGF antibody. The activity of HGF in normal kidney and kidney cortex was detected. Staining and detection of HGF gene in kidney spheres were confirmed. 2. Evaluation of the effectiveness and safety of HGF gene introduction in kidney transplantation; control of HGF gene introduction in kidney transplantation The HGF gene was introduced into the brain in 1, 3, and 6 months. The HGF gene was introduced into the kidney and detected six months later. His liver, lungs, and spleen are not conducive to the development of the disease. The introduction of HGF gene into the tissue inhibits the growth of interstitial cells. The expression of α-smooth muscle actin was inhibited by the introduction of HGF gene. These findings demonstrate the safety and protective effect of HGF gene on kidney transplantation.

项目成果

Takabatake Y, Isaka Y, Mizui M, et al.: "In vivo transfection of hepatocyte grwoth factor ameliorates early manifestations of experimental diabetic nephropathy"J Am Soc Nephrol. 13. 126A (2002)

Takabatake Y、Isaka Y、Mizui M 等人：“肝细胞生长因子的体内转染改善了实验性糖尿病肾病的早期表现”J Am Soc Nephrol。

Isaka Y, Yamada K, Imai E, et al.: "Electroporation mediated HGF gene transfection for preserving graft survival"J Am Soc Nephrol. 13. 126A (2002)

Isaka Y、Yamada K、Imai E 等人：“电穿孔介导的 HGF 基因转染可保持移植物存活”J Am Soc Nephrol。

Mizui M, Isaka Y, Takabatake Y, et al.: "Electroporation-mediated HGF gene transfer ameliorated cyclosporin A nephrotoxicity in rat"J Am Soc Nephrol. 13. 127A (2002)

Mizui M、Isaka Y、Takabatake Y 等人：“电穿孔介导的 HGF 基因转移改善了大鼠环孢菌素 A 肾毒性”J Am Soc Nephrol。