エレクトロポレーション法による腎臓への高効率遺伝子導入法の開発

利用电穿孔法开发高效的肾脏基因转移方法

• 批准号: 12877164
• 负责人: 今井 圓裕
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877164/
• 关键词: electroporation; 遺伝子導入

我々はHVJ-liposome法を用いたメサンギウム細胞への経腎動脈的遺伝子導入法を報告してきたが、HVJ liposome法はその扱いが煩雑で容易に使用できないという欠点があった。今回Electroporation法を用いて簡便にin vivoで糸球体に遺伝子を導入する方法を検討した。左腎動脈よりFITC labeled-oligo DNA溶液を注入し、ピンセット型電極を用いて、パルス電流にて遺伝子導入を行ったのち左腎を摘出し、凍結切片を蛍光顕微鏡で観察した。同様にLacZ遺伝子及びLuciferase遺伝子を導入し、第4日に遺伝子導入を行った単離糸球体を用いてそれぞれX-gal染色にて糸球体での遺伝子発現、Luciferase assayにて各種条件下での遺伝子発現効率を検討した。また、導入4日後の組織障害の有無をPAS染色にて検討した。導入10分後FITC-oligo DNAは全ての糸球体に認められ、導入細胞はメサンジウム細胞であった。X-gal染色にて糸球体の約75%でLacZ遺伝子の発現を認め、Luciferase assayによる検討では、25-100Vの電圧では、電圧が高いほど導入効率が高い傾向が得られたが、100Vのパルス電流では、腎表面に熱傷を認めた。しかし、Electroporationによる糸球体や尿細管に対する組織障害はほとんど認められなかった。以上からElectroporation法により腎糸球体をターゲットとした効率よい遺伝子導入法が確立された。

We use the HVJ-liposome method to tell you that it is easy to use the HVJ liposome method and the HVJ liposome method to use the information you need to know. This time, the Electroporation method is used in the Electroporation method. This time, the Electroporation method is introduced into the Electroporation method. On the left, the FITC labeled-oligo DNA solution is injected into the device, the battery is used, and the current sensor is injected into the line. The device is extracted from the left, and then sliced. In the same way, the LacZ and Luciferase spools were imported, and on the 4th day, the isolated spheres were stained with X-gal, and under all conditions of Luciferase assay, the accuracy of the test was significantly different. Four days after admission, there were abnormal PAS staining and abnormal tissue damage. After entering 10 points, the whole system of FITC-oligo DNA is divided into cells, cells and cells. About 75% of the X-gal staining system is used to detect high-voltage, high-voltage, high-voltage, The system of urine, urine, urine and urine. The above-mentioned Electroporation method is related to the accuracy of the ball system and the rate of entry into the law.

项目成果

Michiko Tsujie,Yoshitaka Isaka, et al: "ELEOTROPCRATION MEDIATED GENE TRANSFER TARGETING GLOMERULI"J.Am.Soc.Nephrol. (in press). (2001)

Michiko Tsujie、Yoshitaka Isaka 等人：“ELEOTROPCRATION 介导的基因转移靶向肾小球”J.Am.Soc.Nephrol。