細胞周期による中心体キナーゼAurora-Aの活性化の時間的・空間的イメージング

细胞周期期间中心体激酶 Aurora-A 激活的时空成像

• 批准号: 14657039
• 负责人: 浦野 健
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657039/
• 关键词: Aurora; 細胞周期; タイムラプス観察; プロテインキナーゼ; ヒストンH3リン酸化; ヒストンH3メチル化; 修飾特異的モノクローナル抗体; GFP融合タンパク質; 細胞分裂; リン酸化酵素; 脱リン酸化酵素; がん; タンパク質分解; イメージング技術; 中心体局在配列; FRET

ショウジョウバエや酵母において染色体分離の調節蛋白質として同定されたプロテインキナーゼのヒトホモローグであるAurora-A, Aurora-BおよびAurora-Cは様々ながん組織においてDNA増幅や蛋白質の発現増強が高率に認められている。またAurora-Aにおいては造腫瘍能を有することも報告されている。本研究では,染色体の赤道面への整列を時間的・空間的・物理的に制御しているプロテインキナーゼAuroraの(細胞周期における)時間的および空間的な活性化および不活性化をin vivoで可視化する系を確立し,この系を用いてAuroraの空間的・時間的な制御機構を解明した検討した。・昨年報告したAurora-Aに引き続き,Aurora-BまたはAurora-CをGFP融合タンパク質として発現する細胞株を樹立しタイムラプス観察を行い,時間的空間的配置を決定した。Aurora-CもAurora-Bと同様に染色体パッセンジャータンパク質であることが判明した。・Auroraファミリーの活性化に必須であるリン酸化部位を同定し,リン酸化モノクローナル抗体を作製することにより,時間的空間的な活性化を可視化した(研究業績#1)。・Aurora-Bにより細胞分裂期特異的にヒストンH3の10番目セリンがリン酸化され,さらに9番目リジンのメチル化との間にクロストークが存在することを,修飾特異的モノクローナル抗体を作製することにより証明した(研究業績#2-4)。・開発したアンチセンス、DNA法を用い,Aurora-Aもヒト細胞において染色体分配に関与することを確認した。本研究ではAuroraファミリーの活性化を可視化する方法を確立した。その結果,Auroraファミリーは細胞分裂期中ごく短期間にそれぞれの局所において活性化されることが判明した。

シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ や yeast に お い て chromosome separation の regulating protein と し て with fixed さ れ た プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ の ヒ ト ホ モ ロ ー グ で あ る Aurora - A, Aurora - B お よ び Aurora - C は others 々 な が ん organization に お い て DNA of rights や protein の 発 now raised strong が high rate に recognize め ら れ て い る. Youdaoplaceholder0 Aurora-Aにお また て て て を abscess creation can を there are する と と と と されて reports されて る る る. This study で は, chromosome の equatorial plane へ の whole column を time, space, physical に suppression し て い る プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ Aurora の (cell cycle に お け る) time お よ び な activeness of the space お よ び activeness を in Vivo で visualization す る を established し, こ の is を with い て Aurora の space, time な system royal institution を interpret し た beg し 検 た. , yesterday reported in し た Aurora - A に lead き 続 き, Aurora - B ま た は Aurora - C を GFP fusion タ ン パ ク qualitative と し て 発 now す る cell lines を set し タ イ ム ラ プ ス 観 examine を い, time space configuration を decided し た. With others in Aurora - C も Aurora - B と に chromosome パ ッ セ ン ジ ャ ー タ ン パ ク qualitative で あ る こ と が.at し た. , Aurora フ ァ ミ リ ー の activeness に must で あ る リ ン を acidification parts with し, リ ン acidification モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を cropping す る こ と に よ り, time space な activeness を visualization し た (research results # 1). , Aurora - B に よ り cell division phase specific に ヒ ス ト ン H3 の 10 times eye セ リ ン が リ ン acidification さ れ, さ ら に 9 times eye リ ジ ン の メ チ ル change と の between に ク ロ ス ト ー ク が exist す る こ と を, modify specific モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を cropping す る こ と に よ り prove し た (research results # 2-4). , open 発 し た ア ン チ セ ン ス, DNA を い, Aurora - A も ヒ ト cells に お い て chromosome distribution に masato and す る こ と を confirm し た. In this study, the で ファ Auroraファ リ リ リ <s:1> <s:1> activation を visualization する method を established the を た. そ の results, Aurora フ ァ ミ リ ー は cells divide the mid-term ご く during short に そ れ ぞ れ の bureau に お い て activeness さ れ る こ と が.at し た.

项目成果

Sugiyama, K.: "Aurora-B associated protein phosphatases as negative regulators of kinase activation"Oncogene. 21. 3103-3111 (2002)

Sugiyama, K.：“Aurora-B 相关蛋白磷酸酶作为激酶激活的负调节因子”癌基因。

Sakai, H.: "MBD3 and HDAC1, two components of the NuRD complex, are localized at Aurora-A-positive centrosomes in M phase"J Biol Chem.. 277. 48714-48723 (2002)

Sakai, H.：“MBD3 和 HDAC1，NuRD 复合物的两个组成部分，位于 M 期的 Aurora-A 阳性中心体”J Biol Chem.. 277. 48714-48723 (2002)

Sasagawa Y.et al.: "Caenorhabditis elegans RBX1 is essential for meiosis, mitotic chromosomal condensation and segregation, and cytokinesis."Genes Cells. 8. 857-872 (2003)

Sasakawa Y.等人：“秀丽隐杆线虫RBX1对于减数分裂、有丝分裂染色体浓缩和分离以及胞质分裂至关重要。”Genes Cells。

Mitsuhashi, S.: "Usage of tautomycetin, a novel inhibitor of protein phosphatase 1 (PP1), reveals that PP1 is a positive regulator of Raf-1 in vivo"J Biol Chem.. 278. 82-88 (2003)

Mitsuhashi, S.：“蛋白磷酸酶 1 (PP1) 的新型抑制剂互变霉素的使用表明 PP1 是体内 Raf-1 的正调节因子”J Biol Chem.. 278. 82-88 (2003)

Yasui, Y., et al.: "Autophosphorylation of a newly identified site of Aurora-B is indispensable for cytokinesis."J.Biol.Chem.. (in press). (2004)

Yasui, Y., 等人：“Aurora-B 新发现的位点的自磷酸化对于胞质分裂是不可或缺的。”J.Biol.Chem..（出版中）。