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幹細胞を用いた腎糸球体再生の試み

尝试使用干细胞再生肾小球

基本信息

批准号：
14657257
负责人：
北村正敬
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Yamanashi (2003-2004)Jikei University School of Medicine (2002)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では糸球体内細胞移植の技術を用い、血管幹細胞・前駆細胞を障害糸球体内に移植するとともに、遺伝子導入フィーダー細胞を用いて血管系の再構築に適した内部環境を整え、失われた細小血管系の再生を目指した。具体的には、間葉系幹細胞等の血管前駆細胞と、血管形成促進因子を遺伝子導入したフィーダーメサンギウム細胞とを、腎動脈より血行性に糸球体内に移植し、硬化の途上にある糸球体の血管網を再生させることが出来るかどうかを検討した。その結果、以下の知見を得た。1.フィーダー細胞を作製するため、インブレッドラット腎臓単離糸球体よりメサンギウム細胞を培養し、クローン化することに成功した。またその細胞がメサンギウム細胞としてのphenotypeを有することを、形態学的に、また各種マーカー分子の発現の検討により確認した。2.この細胞系が実際にフィーダー細胞としての役割を担いうるかを検討するため、分泌型アルカリフォスファターゼ(SEAP)遺伝子をSV40ウイルスプロモーターの制御下で恒常的に発現する細胞を樹立し、正常および腎炎ラット糸球体に移植した。その後経時的に血清を採取し、化学発光測定系によりSEAP活性を評価した。その結果、血清SEAPレベルの明らかな上昇が認められたことにより、フィーダー細胞としての有用性が確認された。3.幹細胞に関しては、インブレッドラット骨髄より間葉系幹細胞の細胞系を樹立することを目指したが、樹立することができなかった。そこでヒト骨髄由来間葉系幹細胞を入手し、それを免疫抑制剤(シクロスポリンおよびFK504)使用下でラットに移植する異種移植の実験系を確立した。4.メサンギウム細胞への血管形成促進因子(VEGF)遺伝子の導入を試みたが、残念ながら高いVEGF活性を有するフィーダー細胞を樹立することができなかった。

This study is aimed at the application of vascular stem cell transplantation technology in vivo and the reconstruction of vascular system in vivo. Specifically, vascular progenitor cells such as mesenchymal stem cells and angiogenesis promoting factors are introduced into the renal artery and the vascular network of the kidney. The results are as follows: 1. Cell culture and development in vitro was successful. The results show that there is no difference between the phenotype of the cell and the morphology of the cell, and the development of various molecules is confirmed. 2. The cell lines were established, normal, and glomerular in vitro under control of the constant occurrence of secretory and secretory (SEAP) gene SV40. The activity of SEAP was evaluated by chemical spectrophotometry in serum samples taken at different times. The results, serum SEAP levels, and the usefulness of the cells were confirmed. 3. The key to stem cells is the establishment of mesenchymal stem cell lines in the international market. The stem cells from mesenchymal stem cells were used to establish a xenograft system using immunosuppressive agents such as FK504. 4. The introduction of VEGF gene into the cells was tested to increase VEGF activity.