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bFGF遺伝子を導入したヒト脂肪前駆細胞を用いた脂肪組織の再生

使用含有 bFGF 基因的人前脂肪细胞再生脂肪组织

基本信息

批准号：
14657282
负责人：
稲本俊
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

倫理委員会の承認のもとに術前に患者からの承諾を得て乳癌手術標本から採取したヒト皮下脂肪組織からvascular-stromal細胞(VS細胞)を分離し、アデノウイルスをベクターとして塩基性繊維芽細胞増殖因子(basic fibroblast growth factor : bFGF)の遺伝子を導入し、in vitroでの増殖、分化に与える影響について検討した。さらに、ヌードマウスに移植し、in vivoでの脂肪組織再生について検討した。bFGF遺伝子導入したVS細胞をin vitroで培養すると核から細胞質にbFGF蛋白を発現してくることが免疫組織染色で確認され、培養上清中にも放出していることがELISAにより認められた。このbFGF遺伝子導入細胞はrecombinantのbFGFを添加した遺伝子非導入のVS細胞と同等の増殖を示し、その増殖促進状態はbFGFの中和抗体により完全に抑制された。また、遺伝子導入後3日目にinsulin、dexamethazoneを含む脂肪分化培地に変更にすると、bFGF遺伝子導入VS細胞も脂肪滴を細胞質内に持つ成熟脂肪細胞へ分化することが観察された。bFGF遺伝子導入VS細胞をtype I collagenをscafoldとしてヌードマウスの背部皮下に移植し、経時的に形態の変化と組織学的な変化を観察した。bFGF遺伝子導入VS細胞を移植したものは、非導入VS細胞にbFGFを徐放化して添加したものと同じように脂肪組織の再生が認められた。以上の結果から、bFGF遺伝子導入したVS細胞は発現したbFGF蛋白がautocrineの機構で作用して増殖し、かつ成熟脂肪細胞への分化能も維持していることが明らかになった。また、その増殖分化の形質はin vivoでも保持され、脂肪組織再生の細胞源として有用である可能性が示された。

The Ethics Committee acknowledges the commitment of patients to breast cancer surgery, including the isolation of vascular stromal cells (VS cells) from subcutaneous fat, the introduction of bFGF (basic fibroblast growth factor), and the review of its effects on proliferation, differentiation and development. In vivo, subcutaneous fat regrowth is discussed. bFGF protein was introduced into VS cells in vitro, and was detected in cytoplasm by immunostaining. The supernatant was released by ELISA. The bFGF gene introduced into the cells was completely inhibited by recombinant bFGF or by neutralizing bFGF antibody in the cells without bFGF gene introduction. 3 days after gene introduction, insulin, dexamethasone, adipocyte differentiation, bFGF gene introduction, adipocyte differentiation, and adipocyte differentiation were observed. The bFGF gene was introduced into VS cells, and its morphological and histological changes were observed. bFGF is introduced into VS cells and transplanted into non-transfected VS cells. bFGF is added to subcutaneous fat and regenerated. As a result, bFGF gene expression in VS-derived adipocytes was enhanced and the differentiation of mature adipocytes was maintained. The cell origin and usefulness of subcutaneous fat regeneration are demonstrated.