权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

新しく開発したコラーゲンゲル法を用いたアポトーシスによる抗癌剤感受性試験の試み

尝试使用新开发的胶原凝胶方法通过细胞凋亡测试抗癌药物敏感性

基本信息

批准号：
14657304
负责人：
川口順敬
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657304/
关键词：
apoptosis 抗癌剤感受性試験 p53遺伝子

项目摘要

消化器癌の抗癌剤治療において、5FU, CDDPは有効な薬剤であり、さらにこれらを併用投与(low dose FP)することにより、相乗効果が期待されることが報告されている。一方抗癌剤が効果を発揮しない場合も多く、臨床上問題になっている。また抗腫瘍効果がDNA阻害のみでなく、apoptosis誘導によっても発揮されることが明らかになってきた。そこで5FU, CDDP, low dose FP等を濃度別にヒト胃癌細胞株、ヒト大腸癌細胞株に添加した場合のapoptosis誘導を観察したところ、各標的細胞のp53遺伝子発現様式との間に関連が示唆された。ヒト胃癌細胞株MKN45(p53 wild type)、MKN28(p53 mutant type)、ヒト大腸癌細胞株HCT116(p53 wild type)、SW480(p53 mutant type)を多種濃度の5FU単独,CDDP単独,或いは両者の混合液中で培養し、flow cytometoryにてDNA contentを測定した。この細胞を同条件でコラーゲンゲル培養し、相対する各細胞を詳細に比較観察し、alive, apoptosis, necrosis及び分類不能型の4形態に亜分類した。ヒト胃癌細胞株MKN45は、5FU及びCDDPの低用量単独投与時にはapoptosisの誘導はみられなかったが、低用量でも両者併用投与群は有意のapoptosis誘導が観察された。一方、MKN28は5FU及びCDDPの単独或いは低用量併用の何れでもapoptosisの誘導は軽度であった。ヒト大腸癌細胞株HCT116は、5FU, CDDPの単独投与と比べ、低用量でも併用投与群でapoptosisの誘導が有意に増加した。一方、SW480は5FU及びCDDPの単独或いは低用量併用の何れでもapoptosisの誘導は認められなかった。ヒト胃癌及び大腸癌細胞株のどちらにおいても、p53遺伝子がwild typeである場合にlow dose FP投与でapoptosisが有意に誘導された。この結果をふまえ、正常なp53をp53 mutant type細胞株MKN28にtransfectし、5FU, CDDPの併用投与でapoptosisを誘導するが観察した。human p53の決定された構造を含んだplasmid DNAまたはvector単独をLipofectamineとPlus reagentを使用してMKN28に導入した後、MKN28,vector+MKN28,p53transfected MKN28それぞれに5FU, CDDPの併用投与を行った。FACS解析結果で,subG1のDNA contentは、それぞれ1.3%,5.7%,13.5%と有意にp53をtransfectしたMKN28で上昇し,apoptosisが有意に誘導された。この結果より、5FU, CDDPの併用療法が効果を発揮する際には、p53が大きく関与していることが示された。その経路として1)p53関連遺伝子であるBaxを活性化しapoptosisを誘導する経路,2)Fas, TRID, DR4, Killer/DR5がreceptorとしてcaspase8,3を活性化する経路が存在し、p53が存在するとcaspase8からBidを活性化しapoptosisを誘導する経路が存在することが推察された。p53が変異するとcaspase8を誘導せずcaspase3を活性化するのみであることが示唆された。

In the treatment of digestive system cancer, the anti-cancer drugs において, 5FU, and CDDP are effective in combination with な薬剤であり and さらにこれらを (low dose) FP) することにより、The multiplication effect is expected されることが report されている. The effectiveness of one anti-cancer drug is limited to many situations and clinical problems. It has anti-tumor effect, DNA-blocking effect, and apoptosis-inducing effect.そこで5FU, CDDP, low dose FP and other concentrations are different for gastric cancer cell lines and colorectal cancer cell lines, and the situations where FP is added are poptosi s induces the detection of p53 in each target cell and shows the relationship between p53 and the target cells.ヒトgastric cancer cell lines MKN45 (p53 wild type), MKN28 (p53 mutant type), ヒトcolorectal cancer cell lines HCT116 (p53 wild type), SW480 (p53 mutant Type): Various concentrations of 5FU alone, CDDP alone, or culture in a mixed solution, flow cytometry, and determination of DNA content. The cells were cultured under the same conditions and the cells were cultured in the same condition, and each cell was compared in detail, alive, apoptosis, necrosis and the type that could not be classified into 4 morphological classifications. The gastric cancer cell line MKN45, 5FU, and CDDP did not induce apoptosis when administered alone at low doses. For those who use low-dose and low-dose drugs, they can also be used to induce apoptosis in groups. On the one hand, MKN28, 5FU and CDDP can be used alone or in combination at low doses to induce apoptosis. In the colorectal cancer cell line HCT116, 5FU and CDDP can be administered alone or in combination with a low dose to induce apoptosis. One, SW480, 5FU and CDDP can be used alone or in combination at low doses to induce apoptosis.ヒトGastric cancer and びColon cancer cell lines のどちらにおいても, p53 left 伝子がwild type である occasion にlow dose FP administration でapoptosis がに inducing された.このRESULTS をふまえ, normal なp53 をp53 mutant type cell line MKN28 にtransfectし, 5FU, CDDP のadministered でapoptosis をinduced するが観看した. Human p53's decision-making structure is made of plasmid DNA and vector+LipofectaminePlus reagent is used and MKN28 is imported. MKN28,vector+MKN28,p53transfected MKN28 それぞれに5FU, CDDPの and を行った. FACS analysis results showed that the DNA content of subG1 was 1.3%, 5.7%, and 13.5%, and the transfection of p53 and MKN28 were increased, and the apoptosis was induced and induced. The results of the combined therapy of このより, 5FU, and CDDP are を発水するinterior には, p53 が大きく关 and していることが Show された.その経路として1)p53-related legacy 伝子であるBax をactivation しapoptosis をinduced する経路, 2)Fas, TRID, DR4, Killer/DR5 receptor, caspase8,3 activated, p53 existsするとcaspase8 からBid をactivation しapoptosis をinduced する経路がexistent することが inference された. p53 is different from caspase8 and induces caspase3 and activates caspase3.