歯髄および歯根膜細胞からの間葉系幹細胞分離法の樹立

牙髓、牙周膜细胞中分离间充质干细胞方法的建立

• 批准号: 14657517
• 负责人: 朝比奈 泉
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo (2003)Tokyo Medical and Dental University (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657517/
• 关键词: 歯髄; 歯乳頭; 歯根膜; 幹細胞; 再生医療; 再生療法; 歯槽骨再生; 埋伏智歯

昨年度の本研究で、ヒト歯髄および歯根膜由来細胞は、その石灰化能に個体差が大きいことが分かった。そこで、安定した研究成果を得るために、不死化した細胞株を用い硬組織形成の検討を行った。1)歯乳頭、歯髄、歯根膜由来細胞の不死化インフォームドコンセントのもとに抜去した智歯より、以下の細胞を調製した。すなわち、わずかに歯冠部に石灰化のみられた鐘状器の歯乳頭、歯根の完成した崩出智歯の歯髄、および歯根膜からコラゲナーゼ処理法により細胞を回収した。これらの細胞に、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)をヒトパピローマウイルス16(HPV16)あるいはSV40と共に細胞に導入した。これらの細胞は約30継代以上生存することが確認できた。2)in vitroにおける細胞増殖、石灰化能の検討歯乳頭細胞(PA)と歯髄細胞(DP)は紡錘形をしたやや小型の細胞で、高い増殖活性を示した。デキサメタゾン、アスコルビン酸およびグリセロリン酸を添加した培地で培養することにより、アルカリフォスファターゼ活性の上昇を認めた。PAはDPに較べ多くの石灰化結節を形成した。しかし、これらの細胞はBMPに対する応答性を欠いていた。一方、歯根膜細胞は(PL)長い突起をもつやや大型の紡錘形細胞で、倍加時間が4-5日と増殖能は低かった。低いアルカリフォスファターゼ活性を示すが、石灰化能はなかった。RT-PCRによってPA、DPはDSPPを強く発現していることを確認した。3)in vivo石灰化能の検討PA、DPをPLLAメッシュ、これにヒドロキシアパタイト薄層コーティングを施したもの(HA-PLLA)あるいは多孔質TCPに播種し、ヌードマウス背部皮下に移植した。6週後に摘出し組織学的検討を行った結果、HA-PLLAにPAを播種したものだけに石灰化像を認めた。この石灰化組織周囲には、骨芽細胞あるいは象牙芽細胞様の細胞を認めなかった。以上の結果から、これらの細胞は、歯胚再生研究に有用であることが示唆された。

In this study, the root membrane derived cells of the tooth and the calcareous energy of the tooth were divided into two groups. The results of this study were obtained, and the study of hard tissue formation in immortal cell lines was carried out. 1) Dental papilla, dental pulp, dental root membrane-derived cells do not die, and the following cells are modulated. The tooth crown is calcareous, the tooth papilla is calcified, the tooth root is calcified, and the tooth root is calcified. The cells were infected with hTERT, which is a reverse transcription enzyme (HPV16). The cells survived for more than 30 generations. 2)In vitro, cell proliferation, calcification, and papillary cell (PA) and papillary cell (DP) were observed. The increase in activity was due to the increase in the number of cells in the cells. PA DP is more than calcareous nodules. In the middle of the day, the cells of the BMP are unresponsive. A square root membrane cell (PL) long middle protrusion, double time, large spindle cell, double time, low growth rate The low carbon content of the catalyst RT-PCR is used to detect PA, DP and DSPP. 3)In vivo calcareous ability to study PA, DP, PLLA, and other factors, such as porous TCP, PLLA, PLLA After 6 weeks, histological examination results were obtained and calcified images were identified. Calcified tissue, bone bud cells, ivory bud cells. The above results are useful for cell regeneration research.

项目成果

Imaizumi F, Asahina I, Moriyama T, Ishii M, Omura K.: "Cultured mucosal cell sheet with a double layer of keratinocytes and fibroblasts on a collagen membrane."Tissue Engineering. (in press). (2004)

Imaizumi F、Asahina I、Moriyama T、Ishii M、Omura K.：“在胶原膜上培养具有双层角质形成细胞和成纤维细胞的粘膜细胞片。”组织工程。

Alam MI, Asahina I, Seto I, Oda M, Enomoto S: "Prefabrication of vascularized bone flap induced by recombinant human bone morphogenetic protein 2 (rhBMP-2)."Int.J.Oral Maxillofac.Surg.. 32. 508-514 (2003)

Alam MI、Asahina I、Seto I、Oda M、Enomoto S：“重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP-2) 诱导的血管化骨瓣预制。”Int.J.Oral Maxillofac.Surg. 32. 508-