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mRNA結合タンパク質の機能を阻害するペプチドの創製と細胞現象への適用

抑制 mRNA 结合蛋白功能的肽的创建及其在细胞现象中的应用

基本信息

批准号：
14657581
负责人：
黒瀬等
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657581/
关键词：
mRNA β1アドレナリン受容体 3'-非翻訳領域 RNA-タンパク質相互作用 AUF-1 キナーゼ

项目摘要

β1アドレナリン受容体(β1受容体)は、心臓での収縮力や心拍数の調節に関与している。交感神経系の興奮が長期にわたると、細胞は受容体数を減少させることで刺激の強さを減弱させようとする。この受容体数減少の過程には、少なくとも受容体遺伝子の転写抑制ならびにmRNAの不安定化が寄与していると考えられている。特に心臓が心不全の状態に陥るとβ1受容体のみが選択的に減少することから、受容体のmRNAに選択的に作用し不安定化を引き起こすRNA結合タンパク質の寄与が推定されている。そこで、大腸菌の転写終結を利用したアッセイ系でRNA結合タンパク質とβ1受容体のmRNAとの相互作用を解析できる系を確立することを試みた。RNA結合タンパク質(AUF1、hnRNAP-β1およびHuR)をN-タンパク質との融合タンパク質として発現させ、一方β1およびβ2受容体の3'非翻訳領域をβ-ガラクトシダーゼの上流に置くと、両者が相互作用するときのみβ-ガラクトシダーゼ活性が観察される。また、RNA結合タンパク質とmRNAとの相互作用の強さは、β-ガラクトシダーゼ活性値と相関する。このアッセイ系を用いて、AUF1はβ1およびβ2受容体のいずれとも相互作用すること、しかしhnRNP-A1とHuRは両受容体と相互作用しないことが明らかになった。次に、RNA結合タンパク質とmRNAの結合がタンパク質キナーゼによって制御されている可能性を検討するために、β受容体刺激で活性が変化するとされるGSK3βを発現させた。GSK3βを発現させると、β1受容体との相互作用が減少したものの、β2受容体との相互作用は変化しなかった。今後、β1受容体のmRNAの不安定化が受容体刺激によって活性化されたGSK3βによるAUF1のリン酸化を介しているのか細胞レベルで検討し、心不全時の選択的なβ1受容体の減少のメカニズムにつなげたい。

β 1 receptor (β 1 receptor), heart beat count, heart beat count and heart beat count. The sympathetic divinity is long-term, the number of cellular receptors is small, the stimulation is strong, the weak is weak, and the number of cells is weak. To reduce the number of recipients, the number of recipients, the number of recipients. Special attention should be paid to the number of errors selected by the recipient with incomplete heart status, the number of errors selected by the recipient, and the instability by the selection of the mRNA, which leads to the combination of RNA and presumption. This method was used to analyze the relationship between RNA and receptor β 1 receptor (mRNA) and to make sure that the system was tested. The combination of RNA with AUF1, hnRNAP- β 1 receptor HuR) and the fusion of β 1 receptor, β 2 receptor, β 1 receptor, β 2 receptor, β 1 receptor, β 2 receptacle, β 2 receptor, β 2 acceptor, β 2 receptor, β 2 receptor, β 2 The interaction between RNA and β-cyclodextrin is very strong, and the activity of β-cyclodextrin is sensitive to each other. AUF1 β 1, β 1, β 2, HuR, hnRNP-A1, receptor, receptor, In the second phase, the combination of RNA and mRNA was used to control the possibility of infection, and the activation of β-receptor was induced by the stimulation of β-receptor. it was found that GSK3 β was not present. GSK3 β receptor showed that there was no significant difference between β 1 receptor and β 1 receptor, and that of β 2 receptor. In the future, β 1-receptor mRNA unstable receptor stimulation induces activation of GSK3 β-receptor AUF1 and acidification of β 1-receptor receptor. The β 1 receptor selected for cardiac arrest and cardiac failure is sensitive.