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mRNA結合タンパク質の機能を阻害するペプチドの創製と細胞現象への適用

抑制 mRNA 结合蛋白功能的肽的创建及其在细胞现象中的应用

基本信息

批准号：
14657581
负责人：
黒瀬等
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657581/
关键词：
mRNA β1アドレナリン受容体 3'-非翻訳領域 RNA-タンパク質相互作用 AUF-1 キナーゼ

项目摘要

β1アドレナリン受容体(β1受容体)は、心臓での収縮力や心拍数の調節に関与している。交感神経系の興奮が長期にわたると、細胞は受容体数を減少させることで刺激の強さを減弱させようとする。この受容体数減少の過程には、少なくとも受容体遺伝子の転写抑制ならびにmRNAの不安定化が寄与していると考えられている。特に心臓が心不全の状態に陥るとβ1受容体のみが選択的に減少することから、受容体のmRNAに選択的に作用し不安定化を引き起こすRNA結合タンパク質の寄与が推定されている。そこで、大腸菌の転写終結を利用したアッセイ系でRNA結合タンパク質とβ1受容体のmRNAとの相互作用を解析できる系を確立することを試みた。RNA結合タンパク質(AUF1、hnRNAP-β1およびHuR)をN-タンパク質との融合タンパク質として発現させ、一方β1およびβ2受容体の3'非翻訳領域をβ-ガラクトシダーゼの上流に置くと、両者が相互作用するときのみβ-ガラクトシダーゼ活性が観察される。また、RNA結合タンパク質とmRNAとの相互作用の強さは、β-ガラクトシダーゼ活性値と相関する。このアッセイ系を用いて、AUF1はβ1およびβ2受容体のいずれとも相互作用すること、しかしhnRNP-A1とHuRは両受容体と相互作用しないことが明らかになった。次に、RNA結合タンパク質とmRNAの結合がタンパク質キナーゼによって制御されている可能性を検討するために、β受容体刺激で活性が変化するとされるGSK3βを発現させた。GSK3βを発現させると、β1受容体との相互作用が減少したものの、β2受容体との相互作用は変化しなかった。今後、β1受容体のmRNAの不安定化が受容体刺激によって活性化されたGSK3βによるAUF1のリン酸化を介しているのか細胞レベルで検討し、心不全時の選択的なβ1受容体の減少のメカニズムにつなげたい。

β1 receptor (β1 receptor) is related to the regulation of contraction force and heart beat number. The excitation of sympathetic nervous system decreases in the number of receptors and the intensity of stimulation decreases. The process of receptor number reduction includes the inhibition of receptor gene expression and mRNA instability. In particular, in the case of cardiac insufficiency, the selection of β1 receptor mRNA is reduced, the selection of receptor mRNA is destabilized, and the RNA binding protein is presumed to be present. The interaction between RNA binding protein and β1 receptor mRNA was analyzed and established. RNA binding proteins (AUF1, hnRNAP-β1 and HuR) are N-linked to the fusion protein, and β1-linked to β2-linked to the 3'non-inverted domain of the receptor. The interaction between RNA binding protein and mRNA is strongly correlated with β-RNA binding activity. The interaction between the receptor and the AUF1 receptor is very important. Second, RNA binding protein and mRNA binding protein GSK3β-receptor interaction decreases and β2-receptor interaction decreases. In the future, instability of β1 receptor mRNA, receptor stimulation, activation of GSK3 β, and AUF1 acidification are mediated by cell cycle detection and selection of β1 receptor reduction in cardiac insufficiency.