B_1-アドレナリン受容体の調節機構

B_1-肾上腺素受体调节机制

• 批准号: 06672171
• 负责人: 黒瀬 等
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06672171/
• 关键词: B_1-アドレナリン受容体; cAMP依存性リン酸化酵素; 受容体キナーゼ; 脱感作

B_1-アドレナリン受容体(B_1-AR)のアゴニスト刺激によって引き起こされる活性調節のメカニズムを明らかにする目的で、以下の実験を行った。まず、B_1-ARは促進性G蛋白質(G_S)を介してアデニル酸シクラーゼを活性化する。その結果として細胞内cAMP量が増加し、cAMP依存性蛋白質リン酸化酵素(PKA)が活性化される。B_1-ARにはPKAによってリン酸化される部位が一カ所存在することから、この部位のセリンをアラニンに変えた変異受容体(PKA変異受容体)を作製した。また、細胞内のカルボキシ末端にもPKA以外の蛋白質リン酸化酵素(おそらく活性化された受容体のみをリン酸化する受容体キナーゼ)によってリン酸化される可能性のあるセリンおよびスレオニンが存在するすることから、この部位を含まないカルボキシ末端を削除した変異受容体(削除受容体)も作製した。野生型受容体、PKA変異受容体および削除受容体を細胞に安定かつ恒常的に発現させた。これらの受容体を発現している細胞をアゴニストで刺激し、細胞膜のアデニル酸シクラーゼ活性を測定すると、野生型受容体およびPKA変異受容体はアゴニスト前処理により脱感作されたが、削除受容体はほとんど脱感作されなかった。この結果は、B_1-ARの脱感作はPKAによるリン酸化が主要な経路であるという従来考えられてきたことを否定するものであり、今回の一連の実験により初めて明らかにされた。この先、削除受容体に存在しないカルボキシ末端をリン酸化する受容体キナーゼの性質を明らかにした後、投稿する予定である。

For the purpose of regulating the activity of B_1-AR receptor (B_1-AR), the following steps were carried out. B_1-AR promotes the activation of G protein (G_S). As a result, intracellular cAMP increased and cAMP-dependent protein kinase (PKA) became active. B_1-AR contains PKA and PKA heteroreceptors. Protein acidification enzymes other than PKA (all activated receptors and receptors) in the cell are controlled by the presence of a protein in the cell and the presence of a protein in the cell. wild-type receptor, PKA variant receptor, and deletion of receptor cells The receptor was found to be unresponsive to stimulation, and the cell membrane activity was determined. The wild type receptor and PKA heteroreceptors were unresponsive to pretreatment. The result is that B_1-AR is insensitive to PKA and the main route is to test the negative effect of PKA. This is the first time that the existence of the receptor has been removed.