B_1-アドレナリン受容体の調節機構

B_1-肾上腺素受体调节机制

基本信息

批准号：
06672171
负责人：
黒瀬等
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

B_1-アドレナリン受容体(B_1-AR)のアゴニスト刺激によって引き起こされる活性調節のメカニズムを明らかにする目的で、以下の実験を行った。まず、B_1-ARは促進性G蛋白質(G_S)を介してアデニル酸シクラーゼを活性化する。その結果として細胞内cAMP量が増加し、cAMP依存性蛋白質リン酸化酵素(PKA)が活性化される。B_1-ARにはPKAによってリン酸化される部位が一カ所存在することから、この部位のセリンをアラニンに変えた変異受容体(PKA変異受容体)を作製した。また、細胞内のカルボキシ末端にもPKA以外の蛋白質リン酸化酵素(おそらく活性化された受容体のみをリン酸化する受容体キナーゼ)によってリン酸化される可能性のあるセリンおよびスレオニンが存在するすることから、この部位を含まないカルボキシ末端を削除した変異受容体(削除受容体)も作製した。野生型受容体、PKA変異受容体および削除受容体を細胞に安定かつ恒常的に発現させた。これらの受容体を発現している細胞をアゴニストで刺激し、細胞膜のアデニル酸シクラーゼ活性を測定すると、野生型受容体およびPKA変異受容体はアゴニスト前処理により脱感作されたが、削除受容体はほとんど脱感作されなかった。この結果は、B_1-ARの脱感作はPKAによるリン酸化が主要な経路であるという従来考えられてきたことを否定するものであり、今回の一連の実験により初めて明らかにされた。この先、削除受容体に存在しないカルボキシ末端をリン酸化する受容体キナーゼの性質を明らかにした後、投稿する予定である。

进行了以下实验，以阐明由B_1-肾上腺素能受体（B_1-AR）激动性刺激引起的活性调节机制。首先，B_1-AR通过启动子G蛋白（G_S）激活腺苷酸环化酶。结果，cAMP细胞内的数量增加，依赖CAMP的蛋白质磷酸酶（PKA）被激活。由于B_1-AR中有一个位点被PKA磷酸化，因此产生了突变受体（PKA突变受体），其中该位点的丝氨酸转化为丙氨酸。此外，由于丝氨酸和苏氨酸可能被PKA以外的蛋白磷酸酶磷酸化（仅PKA（仅磷酸化受体受体受体的受体激酶））也存在于细胞内的羧基末端中，因此也与未含有该部位的碳纤维受体（DELETION受体）中的突变体受体（DELETION受体）也存在。野生型受体，PKA突变受体和缺失受体在细胞中稳定地表达。用激动剂刺激表达这些受体的细胞，细胞膜的腺苷酸环化酶活性表明野生型受体和PKA突变体受体被激动剂预处理脱敏，而缺失受体几乎没有脱敏。该结果否认了传统的信念，即由于PKA磷酸化，B_1-AR的脱敏一直是主要途径，并且在这一系列实验中首次揭示了B_1-AR的脱敏。我计划在阐明缺失受体中不存在的羧基末端的受体激酶的性质后将其发布。