G12ファミリーのGタンパク質を介したシグナルの解析

G12 家族 G 蛋白介导的信号分析

基本信息

批准号：
22K06646
负责人：
黒瀬等
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06646/
关键词：
受容体 Gタンパク質シグナリング G12ファミリーがん化

项目摘要

Gタンパク質は細胞外のシグナルを細胞内に伝える仲介因子として知られている。Gs、Gi、GqおよびG12の4つのグループに分けられる。Gsはアデニル酸シクラーゼの活性化、Giはアデニル酸シクラーゼの抑制、GqはホスホリパーゼCの活性化G12ファミリーはRhoAの活性化を、それぞれ引き起こすと考えられている。G12ファミリーにはG12とG13が含まれている。いずれもRhoAを活性化するものの、in vivoではお互いの機能を相補しないため、RhoA以外のシグナル経路も活性化していると考えられている。すなわちG12とG13はRhoA以外の独自のシグナル経路を活性化していると想定されている。本研究では、G12とG13独自のシグナル経路を、リン酸化プロテオミクスの手法を用いて明らかにすることを目的としている。G12とG13を選択的に活性化するためにクロザピン-N-オキシド（CNO）のみをアゴニストとするデザイナー受容体を用いる。G12選択的デザイナー受容体は作製していることから、G12選択的シグナルの解析を開始した。HEK293A細胞にG12選択的デザイナー受容体を発現させ、CNOで刺激し反応を停止させた後、リン酸化されたペプチドを質量分析にて解析した。G12選択的デザイナー受容体はG12以外にもGqを活性化することから、Gqシグナルの関与はGq阻害剤（YM-254890）を添加することで除く必要がある。また、G12およびG13はRhoAを活性化することから、RhoAキナーゼが共通に活性化されていると考えられている。したがって、RhoAキナーゼ以外でリン酸化されたシグナリング分子を同定することで、G12およびG13選択的シグナリングを明らかにできると考えている。

G蛋白被称为将细胞外信号传播到细胞中的介体。它可以分为四组：GS，GI，GQ和G12。 GS被认为会引起腺苷酸环化酶的激活，GI是抑制腺苷酸环化酶，而GQ被磷脂酶C激活。RHOA的G12家族被认为会导致每种激活。 G12家族包括G12和G13。尽管两者都激活了RhoA，但它们在体内并不补充彼此的功能，因此也认为除RhoA以外的信号途径也被激活。换句话说，假定G12和G13激活RhoA以外的其他信号途径。这项研究旨在使用磷酸化蛋白质组学技术阐明G12和G13的独特信号途径。用氯氮平-N-氧化物（CNO）作为激动剂的设计师受体用于选择性激活G12和G13。随着G12选择性设计器受体的产生，对G12选择信号的分析开始了。 HEK293A细胞用G12选择性设计器受体表达，用CNO刺激以停止反应，然后通过质谱法分析了磷酸化的肽。由于G12选择性设计器受体激活了G1以外的GQ，因此必须通过添加GQ抑制剂来消除GQ信号的参与（YM-254890）。此外，由于G12和G13激活了RhoA，因此人们认为Rhoa激酶通常被激活。因此，我们认为，除了Rhoa激酶以外，鉴定信号分子磷酸化以外的其他磷酸化可以揭示G12和G13选择性信号传导。