ペプチドマトリクスを使った高分子量タンパク質の細胞内送達
使用肽基质进行高分子量蛋白质的细胞内递送
基本信息
- 批准号:14657589
- 负责人:
- 金额:$ 2.24万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2002
- 资助国家:日本
- 起止时间:2002 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
近年、HIV-1 Tat由来の塩基性ペプチドが効率的に細胞膜を透過することが明らかとなり、これをキャリアとしたタンパク質の細胞内導入が報告されている。これらのアプローチにおいては、予め分子内にこれらの配列を組み込んだ形でタンパク質を遺伝子工学的あるいは化学的に調製するか、もしくは、これらのペプチドと目的のタンパク質とを化学的に架橋する必要があり、煩雑な操作が必要であった。この問題の解決のため、本研究では、システインを含んだ疎水化アルギニンペプチドをマトリクスとして用い、目的タンパク質との非共有結合的複合体を形成するアプローチによる細胞内導入法に関して検討を行った。まず、申請者が細胞内DNA導入用に開発したステアリルオクタアルギニンをベースに、分子内にシステインの導入を行い、S-S架橋によりマトリクス構造の安定化を図るとともに、細胞内の還元的環境下でこれらが開裂し、目的タンパク質を放出するようデザインをおこなった。ペプチド合成はFmoc固相法を用いて行い、脱保護後、HPLCを用いて精製した。このペプチドとGFP(緑色蛍光タンパク質)のタンパク質などを混合することにより、タンパク質の細胞内導入を図ったが、おそらくはペプチド中の疎水基とタンパク質との疎水結合が効果的に形成できないために良好な結果は得られなかった。次に、遺伝子工学的に作製したタンパク質の精製にしばしば用いられるヒスチジンタグに着目し、アルギニンペプチドにニッケルキレートを導入し、これとヒスチジンタグを有するGFPを細胞内に導入したところ、共有結合的に結合した場合よりは効率が若干劣ったものの、確かに細胞内への取り込みが促進されることが分かった。現在、これらの系の条件等を詳細に検討することにより、効率の向上を図っている。
In recent years, due to the origin of HIV-1 Tat, the cell membrane of the primary infection rate has been introduced into the cell through the transmission of information. The purpose of this study is to make sure that it is necessary to set up the necessary equipment for the purpose of chemical engineering. The purpose of this study is to form a complex of non-co-operative combination of chemical hydration, hydration, and non-co-operative combination to form a complex that is not co-operative. The DNA of the applicant and the applicant are required to operate in the environment in which the temperature is stable, the temperature is low, the temperature is low, and the temperature is low. The synthesis of Fmoc solid-phase method was carried out by the method of solid phase synthesis. After being uninsured, the solid phase method of HPLC was prepared by the method of solid phase synthesis. In this paper, the effect of different concentrations of water on the formation of GFP was studied in this paper. The results show that the results of the combination of water-based chemicals, water, etc. For the second time and the second time, in the field of sub-engineering, they used to look at the eyes, the eyes. Make sure that the intracellular DNA extraction is used to promote the separation of the cells in the cell. At present, there are some conditions, such as the current situation, the system conditions, and so on.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
S.Futaki: "Arginine-rich peptides : potential for intracellular delivery of macromolecules and the mystery of the translocation mechanisms"Int. J. Pharmaceutics. 245(1-2). 1-7 (2002)
S.Futaki:“富含精氨酸的肽:细胞内传递大分子的潜力和易位机制的奥秘”Int。
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