発生開始期における転写誘導を制御する新規な転写制御因子の機能解析

控制早期发育阶段转录诱导的新型转录调节因子的功能分析

• 批准号: 14658223
• 负责人: 野島 博
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658223/
• 关键词: 精子細胞; Rip経路; 小胞体; 転写制御因子; 核内移行; S1P認識配列; 膜貫通領域; CREM; トランスジェニックマウス; ノックアウトマウス; サブトラクション; ウエスタン解析; ノーザン解析; CREM-tau

我々が包括的に単離したマウス精子形成特異的発現遺伝子群のひとつであるTISP40はTisp40αとTisp40β(N末端に55アミノ酸が付加されたもの)という新規なCREM様転写制御因子をコードする。HeLa細胞ではTisp40α/βは小胞体に局在したが、膜貫通領域を決失させた変異体(Tisp40dTM)は核に局在した。このことからTisp40はATF6やSREBP2と同様にRip経路で制御されていると推測した。また小胞体においてN結合型糖鎖が付加され、bZipを含むN末端が細胞質にあることとTisp40βのみリン酸化されていることを明らかにした。続いてTisp40の結合配列決定のためEMSAアッセイを行った。その結果Tisp40αdTMはATF6結合配列に特異的に結合し1塩基異なるCRE配列には結合しなかった。更にATF6結合配列よりも特異性の高い配列を探索するとともに、コア配列の決定のためATF6結合配列のコア配列(8塩基)について1塩基ずつ点変異を挿入しEMSAを行った。その結果Tisp40βはATF6結合配列よりも特異性の高い配列に結合することを見出した。さらにTisp40α/βは通常小胞体にアンカーされていることを明らかにした。次いでTisp40α/βを膜から開放する機構を解明するため、既に小胞体にアンカーされS1PS2Pによって制御されていることが知られているATF6やREBP2とTisp40α/βのアミノ酸配列を比較した。その結果ATF6やSREBP2同様にTisp40α/βにも膜貫通領域から20アミノ酸C末端側にRXXLというS1P認識配列が、膜貫通領域内にはS2P認識配列が見つかった。これらの結果から、Tisp40は精子形成過程中期においてRip経路を介して核内移行し、CREMの阻害と新たな転写標的の転写誘導を行う可能性があると結論した。

We include the following: Tisp40α and Tisp 40β(N-terminal 55 α and Tisp40β); HeLa cells have Tisp40 α/β in the small cell body and a mutant (Tisp40dTM) in the core that determines the membrane penetration field. Tisp40, ATF6, SREBP2, Rip 6, Rip 7, Rip 8, Rip 9, Rip 9, Rip 9 N-linked glycans are added to the cytosol, and bZip contains N-terminal glycans. The combination of Tisp40 and EMSA determines the alignment of Tisp40. Tisp40αdTM is a specific combination of ATF6 and CRE. In addition, ATF6 binding alignment, high specificity and high alignment are explored, and the determination of ATF6 binding alignment (8-base) is carried out. The results show that Tisp40β binds to ATF6, and the specificity of Tisp 40β binds to ATF6. Tisp40α/β is a common cell. In the second place, the Tisp40 α/β membrane is open to the public, and the ATF6 and REBP2 are open to the public. ATF6 SREBP2 Tisp40α/βThe results show that Tisp40 is a possible mediator of nuclear migration, CREM inhibition, and new writing targets in the metaphase of spermatogenesis.

项目成果

Shimada, M., Nabeshima, K., Tougan, T., Nojima, H.: "The meiotic recombination checkpoint is regulated by checkpoint rad+ genes in fission yeast"EMBO Journal. 21・11. 2807-2818 (2002)

Shimada, M.、Nabeshima, K.、Tougan, T.、Nojima, H.：“裂殖酵母中的减数分裂重组检查点由检查点 rad+ 基因调节”EMBO 杂志 21・11（2002）。

Fujii, T., Tamura, K., Masai, K., Tanaka, H., Nishimune, Y., Nojima, H.: "Use of stepwise subtraction to comprehensively isolate mouse genes whose transcription is upregulated during spermiogenesis"EMBO Report. 3・4. 367-372 (2002)

Fujii, T.、Tamura, K.、Masai, K.、Tanaka, H.、Nishimune, Y.、Nojima, H.：“使用逐步减法全面分离在精子发生过程中转录上调的小鼠基因”EMBO 报告。 3・4。367-372（2002）

Okuzaki, D., Satake, W., Hirata, A., Nojima, H.: "Fission Yeast meu14^+ is required for proper nuclear division and accurate formation of forespore membrane during meiosis II."J.Cell.Sci.. 116・13. 2721-2731 (2003)

Okuzaki, D.、Satake, W.、Hirata, A.、Nojima, H.：“分裂酵母 meu14^+ 对于减数分裂 II 期间正确的核分裂和前孢子膜的准确形成是必需的。”J.Cell.Sci.. 116・13。2721-2731（2003）