控制 DNA 复制和细胞周期检查点的复合物的集成三维结构分析-猫眼课题宝

控制 DNA 复制和细胞周期检查点的复合物的集成三维结构分析

批准号：

13033028

负责人：

野島博

金额：

$1.92万

依托单位：

Osaka University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

财政年份：

2002

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

2002 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13033028/

关键词：

Mcm蛋白質 DNA複製電子顕微鏡画像を解析ドーナツ型構造プルダウンアッセイツーハイブリッドアッセイ DNAヘリカーゼ活性ヒトMcm蛋白質 Pull down assay Two-hybrid assay ヘテロ4量体ヘテロ6量体

项目摘要

项目成果

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我々は電子顕微鏡観察により、6種類のヒトMcm蛋白質(HsMcm2,-3,-4,-5,-6,-7)のうちDNAヘリカーゼ活性を有するMcm4-6-7複合体(ヘテロ6量体)およびその活性が阻害されたMcm2-4-6-7複合体(ヘテロ4量体)の構造を解析した。その結果、まずヒトMcm4-6-7複合体は外径が13-14nm、内径が3-4nmのドーナツ型の構造をとることを見出した。次に、ヒトMcm2-4-6-7複合体については1462個の画像を解析した結果、509,441,278,234という4種類のグループに分かれた。そのうち509,441個の画像はよく似た4つの角を持つ外径が15-18nm、内径が3-4nmのドーナツ型の構造をとっていた。これら4つの角は各HsMcm2,-4,-6,-7蛋白質に由来する画像では無いかと予測される。とくに509個の画像は角のひとつから腕のようなものが伸びているため、この画像がサイズの最大なHsMcm2に由来するのではないかと予想した。この他、大腸菌で発現させ精製したGST-Mcm4,-Mcm6,-Mcm7用いてプルダウンアッセイを行いMcm4とMcm6、Mcm4とMcm7およびMcm6とMcm6の高い相互作用を見出した。また、ツーハイブリッドアッセイも行い、Mcm2とMcm6およびMcm6とMcm6の相互作用を確認した。これは、Mcm6がホモ2量体を形成することを示唆する。これらの結果を総合して、Mcm2-4-6-7ヘテロ4量体ではMcm2,Mcm6,Mcm4,Mcm7の順番で、Mcm4-6-7はヘテロ6量体ではMcm7-Mcm4-Mcm6-Mcm6-Mcm4-Mcm7の順序でドーナツ型の構造をとっていると結論した。

期刊论文(14)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

Shimada, M., Nabeshima, K., Tougan, T., Nojima, H.: "The meiotic recombination checkpoint is regulated by checkpoint rad+ genes in fission yeast"EMBO Journal. 21・11. 2807-2818 (2002)

Shimada, M.、Nabeshima, K.、Tougan, T.、Nojima, H.：“裂殖酵母中的减数分裂重组检查点由检查点 rad+ 基因调节”EMBO 杂志 21・11（2002）。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Watanabe, T., Miyashita, K., Saito, T.T., Yoneki, T., Kakihara, Y., Nabeshima, K., Kishi, Y.A., Shimoda, C., Nojima, H.: "Comprehensive isolation of meiosis specific genes identifies many unusual non-coding transcripts in Schizosaccharomyces pombe"Nucleic

Watanabe, T.、Miyashita, K.、Saito, T.T.、Yoneki, T.、Kakihara, Y.、Nabeshima, K.、Kishi, Y.A.、Shimoda, C.、Nojima, H.：“减数分裂特异性基因的全面分离

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Molnar, M., Parisi, S., Kakihara, Y., Nojima, H., Yamamoto, A., Hiraoka, Y., Bozsik, A., Sipiczki, M., Kohli, J.: "Characterization of rec7, an early meiotic recombination gene in Schizosaccharomyces pombe"Genetics. 177・2. 519-532 (2001)

Molnar, M.、Parisi, S.、Kakihara, Y.、Nojima, H.、Yamamoto, A.、Hiraoka, Y.、Bozsik, A.、Sipiczki, M.、Kohli, J.：“rec7 的表征，粟酒裂殖酵母的减数分裂早期重组基因《Genetics. 177・2. 519-532 (2001)》

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Nabeshima, K., Kakihara, Y., Hiraoka, Y., Nojima, H.: "A novel meiosis-specific protein of fission yeast Meu13p, promotes homologous pairing independently of homologous recombination"EMBO Journal. 20・14. 3871-3881 (2001)

Nabeshima, K.、Kakihara, Y.、Hiraoka, Y.、Nojima, H.：“裂殖酵母 Meu13p 的新型减数分裂特异性蛋白，促进独立于同源重组的同源配对”EMBO 杂志 3871-3881。 (2001)

DOI： --

发表时间：

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