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翻訳フレームを持たない新規なポリAプラスRNA群の機能解析

不具有翻译框架的新型 PolyA-plus RNA 基团的功能分析

基本信息

批准号：
15030227
负责人：
野島博
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は分裂酵母においてpoly(A)の付加したnon-cording RNA (poly(A) plus ncRNA : pncRNA)が多数見出してきた。これらの中には、pncRNA同士がセンスあるいはアンチセンスに重複しているものや、ゲノム中のORFや3'UTRとアンチセンスに重複しているものなどが存在する。新たに減数分裂期特異的に発現するpncRNAを包括的な単離するため、減数分裂期に誘導した細胞からcDNAライブラリーを作成し、減数分裂期に進行しない細胞から抽出した全mRNAを差し引く段階的サブトラクション法を適用した。この差分化ライブラリー中のcDNAの塩基配列を読みゲノム上のORF位置と比較することで、ORFをコードしないcDNA (pncRNA)を同定した。現在までに、約50%のcDNAの解析が完了し、35個の新規pncRNAを同定した。残りのcDNAの解析を終えると、50を越える新規pncRNAの取得が期待できる。これまでに同定したpncRNAの中には、減数分裂特異的に発現する遺伝子とアンチセンスに発現しているものや、減数分裂期に発現する遺伝子を制御するLTR(Long terminal repeat)付近に位置するものも含まれており、これらとの関係についても解析を進めた。一方、RNAi機構と発現制御の関係を明らかにするため、マイクロアレイを用い、野生型株と比較してdcr1破壊株、ago1破壊株において発現が上昇あるいは減少している遺伝子の同定を試みた。その結果、両破壊株ともに高度に発現が上昇している新たな3遺伝子を発見した。また逆に両破壊株で発現が減少している2個の遺伝子も同定した。さらにRNA結合モチーフを持ち、減数分裂期特異的に発現が誘導される遺伝子を2遺伝子同定して機能解析を行った。

In addition, non-cording RNA (poly(A) plus ncRNA : pncRNA) was mostly found in yeast. In this case, the ORF 3'UTR of the pncRNA gene and the pncRNA gene in the pncRNA gene have been deleted. pncRNA is produced specifically at meiosis, including in cells induced at meiosis, and cDNA is produced at meiosis, and mRNA is extracted at meiosis. The ORF position of cDNA (pncRNA) in this differential expression system is identical to that of cDNA (pncRNA). About 50% of the cDNA has been analyzed, and 35 new pncRNAs have been identified. The analysis of residual cDNA is expected to be completed, 50 is expected to be completed, and the new pncRNA is expected to be obtained. The analysis of Long terminal repeat (LTR) gene expression and its relationship between pncRNA gene expression and meiosis specific gene expression is progressing. On the one hand, the relationship between RNAi institutions and discovery control has been clarified. With the use of MAIKUROALIE, the discovery of wild-type strains has increased compared with the dcr1 mutant strain and the ago1 mutant strain, and the determination of genetic mutations has been tested. The result is that the height of the plant is rising, and the number of new plants is increasing. The number of dead plants decreased by two to one. RNA binding is a key factor in the development of meiosis.