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Überexpression des Receptor Activator of NF-KB Liganden (RANKL) zur Untersuchung der metaphysären Frakturheilung im osteoporotischen Großtiermodell

NF-KB 配体受体激活剂 (RANKL) 的过表达用于研究骨质疏松大型动物模型中干骺端骨折的愈合

基本信息

批准号：
43495908
负责人：
Professor Dr. Matthias Schieker
金额：
--
依托单位：
Klinik und Poliklinik für Orthopädie, Physikalische Medizin und Rehabilitation (Campus Großhadern)
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Units
财政年份：
2007
资助国家：
德国
起止时间：
2006-12-31 至 2013-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/43495908?language=en
关键词：
berexpression des Receptor Activator NF

项目摘要

Ziel dieses Projektes ist es, ein Großtiermodell zur Untersuchung der metaphysären Frakturheilung bei der Osteoporose zu entwickeln. Dafür werden transgene Schweine generiert, die Receptor Activator of NF-kB Ligand (RANKL) mit Hilfe des Tet-On-Systems regulierbar exprimieren. In der ersten Förderphase konnten wir transgene Schweine erzeugen, die den Tetrazyklin- Transaktivator (rtTA) konsistent in verschiedenen Geweben exprimieren. Primärzellen dieser Tieren wurden mit einer Transaktivator Response Element (TRE)-RANKL Expressionskassette transfiziert. Doppelt transfizierte Zellen von dem rtTA-transgenen Foundertier mit dem besten Verhältnis aus niedriger Basalexpression und starker Induzierbarkeit der Expression mit Doxycyclin wurden für den Kerntransfer verwendet, woraus vier Trächtigkeiten resultierten (Geburtstermine vom 21.02.-07.03.2010). In der zweiten Antragsperiode werden die Nachkommen molekulargenetisch und im Hinblick auf die Induzierbarkeit der RANKL-Expression charakterisiert. Der osteoporotische Phänotyp RANKL-exprimierender Schweine wird durch Dual-Röntgen- Absorptiometrie (DEXA), biochemische Marker sowie durch histomorphometrische Untersuchungen verifiziert. Schließlich erfolgt eine detaillierte Charakterisierung der metaphysären Frakturheilung im osteoporotischen Schweinemodell.

Ziel dieses Projektes ist es，ein Großtiermodell zur Untersuchung der metabolic ären Frakturheilung bei der Osteoporose zu entwickeln. Dafür韦尔登转基因猪generiert，即NF-κ B配体的受体激活剂（RANKL），通过调节体外Tet-On-Systems的作用。在第一阶段，我们可以将转基因猪转化为四聚体- Transaktivator（rtTA），并在实验中保持一致。首先，该方法使用一个Transaktivator响应元件（TRE）-RANKL表达卡包transfiziert。Doppelt transfizierte Zellen von dem rtTA-transgenen Foundertier mit dem besten Verhältnis aus niedriger Basalexpression und starker Induzierbarkeit der Expression mit Doxycyclin wurden für den Kerntransfer verwendet，woraus维耶Trächtigkeiten resultierten（Geburtstermine vom 21.02.- 2010年3月7日）。在第二个转折点韦尔登，我们发现了分子生物学的发展和RANKL表达特征的工业化。通过双伦琴吸收测定法（DEXA）检测猪的神经病理学表现，通过组织形态计量学观察验证其生化标志物。Schließlich erfolgt eine detaillierte Charakterisierung der metabolic ären Frakturheilung im Schweinemodell.