ヒト肝3α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の胆汁酸結合能と酵素学的検討

人肝脏3α-羟基类固醇脱氢酶的胆汁酸结合能力及酶学研究

• 批准号: 04670444
• 负责人: 滝川 一
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670444/
• 关键词: 3α-hydroxysteroid dehydrogenase; 胆汁酸結合; dihydrodiol dehydrogenase

ヒト肝よりの3α-hydroxysteroid dehydrogenase(3α-HSD)の精製は以下のように行った。なお、各精製過程においては、各カラムフラクションにつき、OD_<280>、3α-HSDおよびdihydrodiol dehydrogenase(DDH)活性とリトコール酸(LC)の結合を測定した。臓器提供者の肝臓から33%ホモジェネートを作成し、100、000gで超遠心しサイトゾールを得た。これをSephadex G75 superfineカラム(5x100cm)にかけ、3α-HSDとDDH活性を有するY'分画(分子量30,000-40,000)を得た。これをAffigel blueカラムにかけ、燐酸バッファーによるgradientにより溶出したところ、2つのLC結合ピークが認められ、最初のピークにはDDH活性のピークが、2つのLC結合ピークの間には3α-HSD活性のピークが認められた。Affigel blueの3α-HSD活性を含む分画をPBE74によるクロマトフォーカシングで分離すると、pH6.0、5.7および5.4に3つの3α-HSDとDDH活性を有するピークが認められた。なお、LC結合はこれらのピークには認められず、より高いpHに3つのピークとして溶出され、そのうちの最も高い結合ピークはbile acid binderと考えられた。これら3つの3α-HSDピークをhydroxyapatite-HPLCでさらに精製するとSDS-PAGE上、すべて分子量36,000の単一バンドを示す蛋白が得られた。各種胆汁酸を基質としてこれらの酵素のenzyme kineticsを検討すると、3つの酵素とも見かけ上のKmはケノデオキシコール酸で1μM、コール酸で40μM程度であり、ラット肝3α-HSDと同程度であった。以上の結果から、ラット肝と異なり、ヒト肝では3α-HSDはbile acid binderとは別に存在し、酵素学的性格はラットに類似するものの胆汁酸結合のは持たず、ヒト肝内での胆汁酸の輸送にはbile acid binderが重要な役割を持つものと考えらた。

The purification of 3α-hydroxystyroid dehydrogenase(3α-HSD) from The <280>activity of 3α-HSD and diol dehydrogenase(DDH) and the binding of L-C in each purification process were determined. 33% of the equipment provider's products are manufactured at 100 and 000g. Sephadex G75 superfine (5x100cm), 3α-HSD and DDH activity were determined by molecular weight (MW) 30,000-40,000. Affigel blue color spectrum, phosphate gradient, dissolution, LC junction, initial DDH activity, LC junction, 3α-HSD activity. Affigel blue has 3α-HSD activity, which can be separated from PBE74, pH 6.0, pH 5.7, pH 5.4, and 3α-HSD activity. The LC junction has a high pH of 3 and a high acid binder. 3α-HSD protein was purified by hydroxyapatite-HPLC and purified by SDS-PAGE. The protein with molecular weight of 36,000 was obtained. The enzyme kinetics of various bile acid substrates and enzymes are discussed in detail. The enzyme kinetics of 3α-HSD are discussed in detail. The enzyme kinetics of 3α-HSD are discussed in detail. The above results show that 3α-HSD is a bile acid binder, and its enzymatic character is similar to that of bile acid binding.

项目成果

H.Takikawa,T.Minagawa N.Sano,M.Yamanaka: "Lithocholate-3-O-glucuronide induced cholestasis.As tudy with congenital hyperbilirubinemic rats." Dig.Dis.Sci.(1993)

H.Takikawa，T.Minakawa N.Sano，M.Yamanaka：“Lithocholate-3-O-glucuronide 诱导胆汁淤积。对先天性高胆红素血症大鼠的研究。”

H.Takikawa,K.Fujiyoshi K.Nishikawa,M.Yamanaka: "Parification of 3α-Hydroxysteroid and 3β-hydroxysteroid dehydrogenases from human liver." Hepatology. 16. 365-371 (1992)

H. Takikawa、K. Fujiyoshi K. Nishikawa、M. Yamanaka：“人肝脏中 3α-羟基类固醇和 3β-羟基类固醇脱氢酶的分离”，16. 365-371 (1992)。

H.Takikawa,S.Arai M.Yamanaka: "Lithocholate binding by Y and Y' proteins in bovine small intestine." Arch.Biochem.Biophys.298. 486-491 (1992)

H.Takikawa、S.Arai M.Yamanaka：“牛小肠中 Y 和 Y 蛋白与石胆酸盐结合。”

H.Takikawa,N.Sano M.Minagawa,M.Yamanaka: "Effects of ursodeoxycholate,itsglucuronide and disulfate and β-muricholate on biliary bicarbonate concentration." J.Hepatol.15. 77-84 (1992)

H.Takikawa、N.Sano M.Minakawa、M.Yamanaka：“熊​​去氧胆酸盐、其葡萄糖醛酸和二硫酸盐以及β-鼠胆酸盐对胆汁碳酸氢盐浓度的影响。J.Hepatol.15（1992）”

N.Sano,H.Takikawa M.Yamanaka: "Estradiol-17β-glucaronide induced cholestasis:Effects of ursodeoxycholate-3-O-glucuronide and 3,7-disulfate" J.Hepatol.17. 241-246 (1993)

N.Sano，H.Takikawa M.Yamanaka：“雌二醇-17β-葡萄糖醛酸诱导的胆汁淤积：熊去氧胆酸-3-O-葡萄糖醛酸和3,7-二硫酸盐的影响”J.Hepatol.17（1993）。