ヒト肝サイトゾールY′胆汁酸結合蛋白の酵素学的検討

人肝细胞质Y′胆汁酸结合蛋白的酶学研究

• 批准号: 63570330
• 负责人: 滝川 一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570330/
• 关键词: ヒト肝サイトゾール; 胆汁酸結合蛋白; 3α-hydroxysteroid dehydrogenase(3α-HSD); 3βーhydroxysteroid dehydrogenase(3β-HSD); dihydrodiol dehydrogenase(DDH); 平衡透析; Western blot

剖検肝のサイトゾール画分から、ゲル3過によりY′分画(MW3〜4万)を得、これをクロマトフォーカシングで分画した。クロマトグラム上、^<14>Cーリトコール酸を用いた平衡透析法による胆汁酸結合のピークはPI7.2にみられ、3β-hydroxysteroid dehydrogenase(3β-HSD)およびdihydrodiol dehydrogenase(DDH)活性とともに溶出された。このピークとは別に。PI5.2で3αーhydroxysteroid dehydrogenase(3α-HSD)活性のピークが溶出された。また、^<14>Cー3ケト-コール酸よりの生成物をTLCで検討したところ、前者のピークではイソコール酸、後者のピークではコール酸であり、各々のHSD活性に対応した反応がおこっていることを確認した。家兎で作製した抗ヒトY′胆汁酸結合蛋白抗体を用いたWestern blot法では、クロマトフォーカシング上の胆汁酸結合ピークのみで36kDのバンドが検出された。SDS-PAGE上、胆汁酸結合ピークは36kDのバンドの他にもう1本の低分子量のバンドがかすかに認められたが、FPLCによるゲル3過により36kDの単一バンドになるとともに、酵素活性はDDH活性のみが保持され、3β-HSD活性は消失した。このDDH活性は胆汁酸により非競合阻害をうけることから、同蛋白上のDDH基質を胆汁酸の結合部位は異なるものと予想された。3α-HSDの見かけ上のKmは、リトコール酸、コール酸でそれぞれ、2.6μM、37μMであったが、3β-HSDのKmはイソコール酸で570μMと高値であった。ラット肝の主たる胆汁酸結合蛋白であるY′binder(MW3.3万)は3α-HSDと同一であったのに対し、さらに強い胆汁酸結合能をもつヒト肝のY′binderは3α-HSDとは異なりDDH活性のみを有し、胆汁酸関連のHSD活性を持たないことが判明した。また、ヒト肝のY′binderはDDHの基質とならない胆汁酸と強く結合し、ヒト肝内での胆汁酸輸送に重要な役割を持つものと考えられた。

Cutting 検 liver の サ イ ト ゾ ー ル draw points か ら, ゲ ル 3 a に よ り Y 'paintings (MW3 ~ 40000) を better, こ れ を ク ロ マ ト フ ォ ー カ シ ン グ で points draw し た. ク ロ マ ト グ ラ ム, ^ < > 14 C ー リ ト コ ー を ル acid with い た equilibrium dialysis method に よ る bile acid combined with の ピ ー ク は PI7.2 に み ら れ, 3 beta - hydroxysteroid dehydrogenase (3 beta HSD) お よ び dihydrodiol dehydrogenase(DDH) activity とと に に dissolves された. Youdaoplaceholder2 ピ ピ ピ と と に do not に. The activity of PI5.2で3α -hydroxysteroid dehydrogenase(3α-HSD) is <s:1> ピ and <s:1> が が dissolved された. ま た, ^ < > 14 C ー 3 ケ ト - コ ー ル acid よ り の products を TLC で beg し 検 た と こ ろ, the former の ピ ー ク で は イ ソ コ ー ル acid, the latter の ピ ー ク で は コ ー ル acid で あ り, various 々 の HSD activity に 応 seaborne し た anti 応 が お こ っ て い る こ と を confirm し た. Home 兎 で cropping し た resistance ヒ ト Y 'bile acid binding protein antibody を with い た Western blot method で は, ク ロ マ ト フ ォ ー カ シ ン グ の on bile acid combined with ピ ー ク の み で 36 kd の バ ン ド が 検 out さ れ た. On sds-page, bile acid combined with ピ ー ク は 36 kd の バ ン ド の he に も う this の low molecular weight の バ ン ド が か す か に recognize め ら れ た が, FPLC に よ る ゲ ル 3 a に よ り 36 kd の 単 a バ ン ド に な る と と も に, enzyme activity は DDH active の み が keep さ れ disappeared, 3 beta HSD activity は し た. こ の DDH active は bile acid に よ り concurrence of the resistance against を う け る こ と か ら, with protein の DDH matrix を bile acid の combining site は different な る も の と to think さ れ た. 3 alpha HSD の see か け の Km は, リ ト コ ー ル acid, コ ー ル acid で そ れ ぞ れ 37 mu, 2.6 mu M, M で あ っ た が, 3 beta HSD の Km は イ ソ コ ー ル acid で 570 microns on と high numerical で あ っ た. ラ ッ ト liver の main た る bile acid binding protein で あ る Y 'binder (MW3.3 wan) は 3 alpha HSD と same で あ っ た の に し, seaborne さ ら に strong い bile acid binding energy を も つ ヒ ト liver の Y' binder は 3 alpha HSD と は different な り DDH active の み を し, bile acid masato even の HSD activity を hold た な い こ と Youdaoplaceholder0 determines that た. ま た, ヒ ト liver の Y 'binder は DDH の matrix と な ら な い bile acid と く combining し, ヒ ト intrahepatic で の bile acid conveying に cut を hold important な service つ も の と exam え ら れ た.

项目成果

滝川一: "第5回肝代謝研究会報告集 ヒト肝GSHS-transferase(GST)isozymeのANS結合酵素活性に関する検討。" 肝代謝研究会運営委員会(アサヒメディカル), (1981)

Hajime Takikawa：“第五届肝脏代谢研究小组的报告。人肝脏 GSHS 转移酶 (GST) 同工酶的 ANS 结合酶活性研究。肝脏代谢研究小组指导委员会（朝日医疗），(1981)

Hajime Takikawa.: J.Lipid Res.29. 279-286 (1988)

Hajime Takikawa.：J.Lipid Res.29。

Hajime Takikawa.: Biochim.Biophys.Acta. 954. 37-43 (1988)

Hajime Takikawa.：生物化学、生物物理学学报。

滝川一: "日本薬物動態学会主催ミニシンポジウム「肝臓における薬物及び内因性物質の動態と代謝:薬学と医学の複合領域を巡って」講演要旨集ー胆汁酸の肝内移行動態、肝細胞内結合蛋白の役割。" ミニシンポジウム世話人会(東京大学薬学部製剤学教室内), 59-68 (1988)

泷川肇：《日​​本药代动力学学会主办的小型研讨会：肝脏中药物和内源性物质的动力学和代谢：药理学和医学结合领域的研究》摘要集 - 胆汁酸转运到肝脏的动力学，肝细胞内结合蛋白质的作用。