PCRによる日本人αサラセミアの遺伝子解析

日本α地中海贫血的PCR遗传分析

• 批准号: 04671435
• 负责人: 服部 幸夫
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671435/
• 关键词: αサラセミア; PCR

【PCRプライマーの作成】転写活性を有するαグロビン遺伝子には相同性の高い二つの遺伝子(α1,α2)がある。それぞれの遺伝子の5′側千塩基以上まで同一配列であるが、3′非翻訳領域には異なる配列が少し見出される。以上より、5′プライマーは同一とし、3′非翻訳領域に設けられた配列の異なる二つの3′プライマーでα1とα2遺伝子増幅を区別をすることにした。プライマーの配列は以下の通り;5′‐CACTCTTCTGGTCCCCACAGACTCA(5′α共通)、5′‐CCCATGCTGGCACGTTTCTGAG(3′α1)、5′‐AACACCTCCATTGTTGGCACATTCC(3′α2)。遺伝子欠失によるα^+サラセミアには二つの欠失の仕方があり、相同性の低い部分に適当なプライマーを設定することによりそれぞれを特異的に増幅することが可能であるはずである。この目的で5′‐CCTCACCTACATTCTGCAACACAG(5′α‐RD)を設けた。【PCRによるαグロビン遺伝子の増幅】上記プライマーを用いてα1、α2グロビン遺伝子の特異的増幅を試みた。しかし、予想以上にこれは難しく、多くの非特異的増幅が得られるばかりであった。そのために別の配列のプライマーを用いて現在も検討中である。α遺伝子に関してはやっと増幅が成功したかもしれない状況にある。増幅されたDNA断片の電気泳動上の認識は本研究費で購入されたUVトランスイルミネーターを用いて行っている。また確定のためにはビチオン化プローブを、PCRには多くのDNAポリメラーゼを用いた。【PCRによるα^+サラセミア遺伝子の増幅およびそのスクリーニング】α^+サラセミア遺伝子(一遺伝子欠失)の特異的増幅も上記と関連しており、未だ成功に至っていない。したがって、スクリーニングを行えるまでに至っていない。本課題のPCRによる日本人αサラセミアの遺伝子解析(迅速診断)の試みは挫折を強いられているが現在もなお、粘り強く継続中である。

[PCR preparation] The activity of the gene is high and the identity of the gene (α1,α2) is high The 5′-side base and above of the gene are arranged in the same sequence, and the 3′-side base and above are arranged in different sequences. The difference between the above 5′ and 3′ non-inverted fields is that the α1 and α2 molecules are different. 5′‐ CACTTCTGGTCCCCAGACCCA (5′α common), 5 ′ ‐ CCCATGCTGGCACGTTTCTGAG(3′α1), 5 ′‐ AACACCTCCATTGTTGGCATTCC (3′α2). The missing part of the missing 5′-CCTCACATTCTGCACAG (5′α-RD) [Amplitude of PCR α-fragment] On the record, the amplification of α1 and α2-fragment is tested. I want to be above you, but I don't want to be above you. The use of other configurations in the company is now under discussion. A: The situation is very serious. The study is aimed at understanding the electrokinetic behavior of DNA fragments. To determine whether the DNA sequence is correct, PCR is used. [Amplitude increase of α^+ Serraa gene during PCR and its spread] The specific amplitude increase of α^+ Serraa gene (a gene defect) is recorded and related, and even if it is not successful, it will be completely successful. The first step is to make sure that you have a good time. The PCR of this subject was carried out by Japanese researchers to analyze the gene (rapid diagnosis) and try to reverse the frustration.