未知の広範囲遺伝子欠失断端の簡単な同定法の開発、および本法による疾患多様性の解明

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平成16年度に広範囲欠失の詳細な欠失断端を、定量的PCR (LightCycler)と新たに開発したJunction PCRを用いて比較的簡単に同定出来る方法を開発した。そして、日本人には発見されていなかったεγδβ-サラセミアの4例3家系(39,46,118kb欠失)の同定に成功した。本年度はさらに発展して、εγδβ-サラセミア2家系(各1.41,1.4Mbの欠失)、βサラセミア1家系(116kb欠失)、δβサラセミア6家系(27kb欠失)、逆位のδβサラセミア1家系の同定に成功した。最後のケース以外は全て報告のない新しい変異であった。本法によって、従来FISHが効力を発揮していた1Mbを越える広汎欠失の症例も簡単に同定可能であり、しかも厳密な欠失段端をも決定することが可能であることが証明された。本法が遺伝子分析上、画期的な方法であることが分かる。一方、成功していなかったαグロビン遺伝子群の分析の検討を行い、欠失断端近辺に高度の繰り返し配列があるとreal-time PCRが困難であることが明確となった。このような配列の攻略は今後の課題として残る。これらの広範囲欠失はいずれも相同組み換えではないことも明らかとなった。上記の5種類のεγδβ-サラセミアに関しては、ゲノムプロジェクトのデーターベースより、多数のolfactory domainがβグロビン遺伝子群とともに欠失していることが判明しているが、その他に有意な遺伝子が少なく、一見表現型の差は見出されなかった。「嗅覚」の微妙な違いに関しては検査法がない。一方、εγδβ-サラセミアで見られる出生時の貧血の重篤化は症例による差が観察された。